Identification of proteins interacting with pORF5 in the pathogenesis of C. Trachomatis
作者：
Zou, Yan;Dai, Wenting;Lei, Wenbo;Su, Shengmei;Huang, Qiulin;...
期刊：
AMERICAN JOURNAL OF TRANSLATIONAL RESEARCH ,2018年10(6):1633-1647 ISSN：1943-8141
通讯作者：
Li, Zhongyu
作者机构：
[Li, Zhongyu; Zhou, Zhou; Zou, Yan; Su, Shengmei; Dai, Wenting; Lei, Wenbo; Chen, Chaoqun] Univ South China, Sch Med, Pathogen Biol Inst, 28 Changsheng West Rd, Hengyang 421001, Hunan, Peoples R China.;[Huang, Qiulin] Univ South China, Dept Gen Surg, Affiliated Hosp 1, Hengyang 421001, Hunan, Peoples R China.;[Li, Zhongyu] Hunan Prov Cooperat Innovat Ctr Mol Target New Dr, Hengyang 421001, Hunan, Peoples R China.
通讯机构：
[Li, Zhongyu] U;Univ South China, Sch Med, Pathogen Biol Inst, 28 Changsheng West Rd, Hengyang 421001, Hunan, Peoples R China.
关键词：
Chlamydia trachomatis (C. trachomatis);HMGB1;isobaric tags for relative and absolute quantitation (iTRAQ);pORF5;quantitative proteomic analysis
摘要：
Objective: This study is to identify and investigate the proteins interacting with pORF5 implicated in the pathogenesis of C. trachomatis. Methods: The isobaric tags for relative and absolute quantitation (iTRAQ) approach combined with nano liquid chromatography-tandem mass spectrometry (NanoLC-MS/MS) analysis was applied to identify and quantify the differentially expressed proteins in the pORF5-transfected HeLa (pORF5-HeLa) cells and the control vector-transfected HeLa (vector-HeLa) cells. Quantitative real-time PCR (qRT-PCR) and Western blot analysis were performed to detect the mRNA and protein expression levels. Results: Totally 3355 proteins were quantified by employing biological replicates, 314 of which were differentially expressed between the pORF5-HeLa and vector-HeLa cells. Nine differentially expressed proteins (HIST1H1C, HBA1, PARK7, HMGB1, HMGB2, CLIC1, KRT7, SFN, and CDKN2A) were subjected to qRT-PCR, and two over-expressed proteins (HMGB1 and PRAK7) were subjected to the Western blot analysis, to validate the proteomic results. The results from the qRT-PCR and Western blot analysis were consistent with the findings from the proteomic analysis. Moreover, pORF5 could inhibit the TNF-α-induced apoptosis in HeLa cells. Through siRNA-mediated functional screening, the high-mobility group box 1 (HMGB1) was shown to be relevant to the inhibition of the apoptotic response in the host cells. Conclusion: Identification of key proteins interacting with pORF5 could contribute to the understanding and further exploration of the function of pORF5 in the pathogenic mechanisms of C. trachomatis. © 2018, E-Century Publishing Corporation. All rights reserved.
语种：
英文
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基于虚拟环境下的医学微生物学实验教学模式研究
作者：
李忠玉;赵飞骏;朱翠明;周洲;曾焱华
期刊：
教育教学论坛 ,2017年(45):279-280 ISSN：1674-9324
作者机构：
南华大学医学院医学微生物学教研室,湖南 衡阳,421001;[李忠玉; 赵飞骏; 朱翠明; 曾焱华; 周洲] 南华大学
关键词：
虚拟环境;医学微生物学;实验教学模式
摘要：
实验教学是医学微生物学教学的重要组成部分,将虚拟实验引入医学微生物学实验教学,不仅可以拓展实践教学内容,强化实验操作技能,而且可以充分调动学生的学习积极性,有效提高学生的科研思维和创新能力。构建医学微生物学虚拟实验教学模式,应建立以学生为主体的实验设计思路,加大医学微生物学虚拟实验教学资源建设,加强虚拟教学团队建设,完善保障和激励机制,这样才能不断推动实验教学的改革与创新,培养创新性医学人才。
语种：
中文
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沙眼衣原体质粒蛋白pORF5通过上调HMGB1抑制细胞凋亡机制初步研究
作者：
李忠玉;雷文波;卜继常;粟盛梅
作者机构：
[李忠玉; 雷文波; 卜继常; 粟盛梅] 南华大学医学院病原生物学研究所
会议名称：
第十二届全国免疫学学术大会
会议时间：
2017-10-26
会议地点：
中国天津
会议论文集名称：
第十二届全国免疫学学术大会摘要汇编
关键词：
沙眼衣原体;质粒蛋白pORF5;细胞凋亡;高迁移率族蛋白B1
摘要：
目的:探讨（Chlamydia trachomatis,Ct）质粒蛋白pORF5对细胞凋亡的影响,并进一步分析其分子机制,为进一步阐明Ct致病机制中的作用提供实验依据。方法:用浓度分别为2μg/ml、4μg/ml、6μg/ml、8μg/ml、10μg/ml的pORF5质粒蛋白分别刺激HeLa细胞0h、6h、12h、18h、24h,Western blot检测HeLa细胞HMGB1、细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3的表达水平;JC-1荧光探针检测HeLa细胞线粒体膜电位变化情况;间接免疫荧光分析细胞色素c的释放情况;采用HMGB1 shRNA稳定干扰HeLa细胞中HMGB1的表达;pORF5蛋白刺激后,测定HeLa细胞凋亡相关指标。结果:pORF5质粒蛋白以剂量和时间依赖性诱导HeLa细胞表达HMGB1,4μg/ml pORF5刺激HeLa细胞18h时,HMGB1的表达水平达到峰值;JC-1荧光探针检测结果显示pORF5质粒蛋白在一定程度上能减弱CCCP诱导的线粒体膜电位的下降;pORF5质粒蛋白能增强Bcl-2的表达水平,降低Bax和cleaved Caspase-3的表达水平;同时pORF5能抑制CCCP诱导细胞色素c的释放。HMGB1 shRNA稳定干扰HeLa细胞HMGB1的表达后,线粒体膜电位下降,Bcl-2的表达水平降低,而Bax的表达水平增加。结论:沙眼衣原体质粒蛋白pORF5通过上调HMGB 1的表达抑制细胞凋亡。
语种：
中文
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沙眼衣原体pORF5质粒蛋白抑制肿瘤坏死因子α诱导HeLa细胞凋亡
作者：
杨晓玉;邹燕;龚思露;卜继常;周洲;...
期刊：
中华皮肤科杂志 ,2017年50(5):341-345 ISSN：0412-4030
作者机构：
[杨晓玉; 邹燕; 龚思露; 卜继常; 周洲; 刘良专; 李忠玉] 南华大学医学院病原生物学研究所医学微生物学教研室, 特殊病原体防控湖南省重点实验室, 湖南, 衡阳, 421001
关键词：
沙眼衣原体;细胞凋亡;肿瘤坏死因子α;半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3;bcl-2相关X蛋白质;B细胞淋巴瘤/白血病-2蛋白;pORF5质粒蛋白
摘要：
目的探讨沙眼衣原体质粒蛋白pORF5对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导HeLa细胞凋亡的影响。方法将含pORF5基因的慢病毒重组表达载体与辅助质粒共转染293T细胞制备慢病毒,慢病毒收集浓缩后再感染HeLa细胞,流式细胞仪分选获得pORF5基因稳定转染细胞株(pORF5-HeLa),同时建立空载体转染对照细胞株(对照HeLa)。将两种细胞株分别分为两组,一组用20 μg/L TNF-α处理(处理组),一组仅用新鲜培养基培养(未处理组),作用6 h,Hoechst33258染色观察凋亡细胞形态,流式细胞仪检测细胞凋亡率,实时PCR检测凋亡相关蛋白Caspase3、Bcl-2和Bax mRNA表达水平,Western印迹检测BaX、Bcl-2蛋白表达水平。结果TNF-α处理细胞6 h后,Hoechst33258染色发现pORF5-HeLa和对照HeLa细胞中均可见不同程度的核固缩、碎裂,高亮蓝色凋亡小体;pORF5-HeLa细胞的凋亡率为(35.5 ± 4.5)%,对照HeLa细胞凋亡率为(63.6 ± 5.8)%,均显著高于相应未处理组[(9.5 ± 1.5)%和(7.9±0.9)%,t值分别为13.53、32.36,均P< 0.01]。处理组pORF5-HeLa细胞中Bax和Caspase3 mRNA表达水平较处理组对照HeLa细胞分别降低72.8%和84.5%(t值分别为35.29,42.25,均P< 0.01),但Bcl-2 mRNA的表达水平显著高于处理组对照HeLa细胞(t = 87.12,P< 0.01)。处理组pORF5-HeLa细胞中Bax蛋白表达水平亦显著低于处理组对照HeLa细胞(t = 17.58,P < 0.01),而蛋白表达水平较对照HeLa细胞增加6.8倍,差异有统计学意义(t = 18.93,P < 0.01)。结论pORF5可能通过增强抗凋亡蛋白Bcl-2降低促凋亡蛋白Caspase3和Bax的表达,抑制TNF-α诱导的HeLa细胞凋亡。
语种：
中文
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沙眼衣原体pORF5稳定转染HeLa细胞后宿主蛋白转录谱分析
作者：
戴文婷;何战胜;粟盛梅;周洲;陈超群;...
期刊：
中华微生物学和免疫学杂志 ,2017年37(1):6-13 ISSN：0254-5101
通讯作者：
Li, Z.
作者机构：
[戴文婷; 李忠玉; 何战胜; 粟盛梅; 周洲; 陈超群] Pathogenic Biology Institute, School of Medicine, University of South China/Hunan Provincial Key Laboratory for Special Pathogens Prevention and Control, Hengyang, 421001, China
通讯机构：
[Li, Z.] P;Pathogenic Biology Institute, School of Medicine, University of South China/Hunan Provincial Key Laboratory for Special Pathogens Prevention and Control, Hengyang, China
关键词：
沙眼衣原体;pORF5基因;同位素标记相对和绝对定量;蛋白质组学技术;差异蛋白质
摘要：
目的分析沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)质粒蛋白pORF5基因对HeLa细胞蛋白质表达谱的影响,为深入研究Ct致病机制提供实验依据。方法构建pORF5基因慢病毒表达载体,与辅助质粒共转染293T细胞包装慢病毒颗粒,收集慢病毒后感染HeLa细胞,流式细胞术多次分选获得pORF5基因稳定转染的HeLa细胞系(pORF5-HeLa细胞系)和对照HeLa细胞系。采用同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)技术结合二维液相色谱串联质谱(2DLC-MS/MS)技术建立pORF5-HeLa细胞和对照HeLa细胞蛋白质表达谱,筛选并构建差异蛋白质表达数据库,采用qRT-PCR和Western blot方法对部分差异蛋白质进行验证。结果成功建立了稳定过表达pORF5基因的HeLa细胞系和对照细胞系;采用iTRAQ结合2D LC-MS/MS质谱技术共鉴定了314个差异表达的宿主蛋白质,其中有159个蛋白质表达上调,155个蛋白质表达下调。差异蛋白质主要涉及代谢过程、免疫应答、生物黏附等众多事件。pORF5基因转染的HeLa细胞中组蛋白H1.2C(HIST1H1C)、血红蛋白α亚基(HBA1)、帕金森蛋白(PARK7)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、HMGB2的mRNA表达水平上调,而胞内氯离通道蛋白1(CLIC1)、细胞角蛋白7(KRT7)、SFN(14-3-3σ)、周期素依赖性刺激抑制因子2A(CDKN2A)的mRNA表达水平下调,Western blot证实PARK7、HMGB1蛋白表达水平增加,这些结果均与蛋白质组学结果一致。结论成功构建了pORF5基因稳定转染HeLa细胞的差异蛋白质表达谱,发现了一组受pORF5基因调控并与细胞代谢、增殖和黏附等生物学过程相关的差异表达蛋白质。提示pORF5可能通过改变宿主蛋白质的表达,影响宿主细胞生物学行为以促进Ct的生长发育。
语种：
中文
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沙眼衣原体pORF5质粒蛋白对HeLa细胞自噬的影响
作者：
杨晓玉;雷文波;粟盛梅;陈超群;李忠玉
期刊：
中国病原生物学杂志 ,2017年12(4):311-316 ISSN：1673-5234
作者机构：
[杨晓玉; 雷文波; 粟盛梅; 陈超群; 李忠玉] 南华大学医学院病原生物学研究所, 湖南省特殊病原体防控重点实验室, 湖南, 衡阳, 421001
关键词：
沙眼衣原体;pORF5质粒蛋白;细胞自噬;微管相关蛋白1轻链3
摘要：
目的探讨沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)质粒蛋白pORF5对HeLa细胞自噬的影响,为进一步阐明Ct致病机制提供实验依据.方法PCR扩增Ct pORF5质粒蛋白基因,克隆入PLenO-DCE 慢病毒质粒,构建慢病毒重组表达载体.慢病毒重组表达载体经双酶切及测序鉴定后与辅助质粒共转染293T细胞,制备慢病毒.收集慢病毒,再感染HeLa细胞,流式细胞仪分选获得pORF5基因稳定转染细胞株(PLenO-DCE/pORF5-HeLa).实验同时建立对照细胞株(PLenO-DCE-HeLa).血清饥饿处理两组细胞24 h,Real-time PCR和Western blot检测微管相关蛋白1轻链3(LC3)、Becin1的蛋白和mRNA表达水平,计算LC3-II/LC3I比率;采用间接免疫荧光检测自噬荧光斑点.结果PLenO-DCE/pORF5-HeLa 和PLenO-DCE-HeLa细胞饥饿处理后均出现LC3红色荧光斑点,斑点数分别为(97.6±12.1)个/细胞和(34.0±2.6)个/细胞,差异有统计学意义(t=45.36;P<0.05);饥饿处理后PLenO-DCE-HeLa和PLenO-DCE/pORF5-HeLa细胞中LC3、Beclin1的mRNA表达水平均显著高于未处理组,其中PLenO-DCE/pORF5-HeLa细胞中LC3、Beclin1 mRNA的表达水平较未处理组增加3.10倍(t=95.25;P<0.01)和0.85倍(t=16.56;P<0.05),较PLenO-DCE-HeLa细胞分别增加1.95倍(t=79.12;P<0.01)和1.57倍(t=23.95;P<0.05);PLenO-DCE/pORF5-HeLa经饥饿处理24 h后LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比率和Beclin1蛋白较未处理组分别增加52.17%和76.00%(t值分别是15.13,57.24;P_均<0.05),较PLenO-DCE-HeLa细胞组分别增加1.05倍(t=35.21;P<0.05)和4.34倍(t=112.23;P<0.01).结论pORF5质粒蛋白可诱导HeLa细胞自噬,可能在Ct致病过程中发挥重要作用.
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鼠衣原体在不同遗传背景小鼠中病变差异性与炎症细胞动态变化
作者：
周洲;陈建林;张洪波;陈丽丽;李忠玉;...
期刊：
微生物学通报 ,2017年44(8):1927-1937 ISSN：0253-2654
作者机构：
南华大学医学院病原生物学研究所, 湖南, 衡阳, 421001;中南大学湘雅二医院妇产科, 湖南, 长沙, 410011;中南大学湘雅二医院病理科, 湖南, 长沙, 410011;[周洲; 陈丽丽; 李忠玉; 吴移谋] 南华大学医学院病原生物学研究所, 湖南, 衡阳, 421001;[陈建林] 中南大学湘雅二医院妇产科, 湖南, 长沙, 410011
关键词：
鼠衣原体;小鼠模型;输卵管水肿;病变率;炎症细胞
摘要：
【目的】初步分析鼠衣原体(Chlamydia muridarum,Cm)致不同遗传背景小鼠生殖道病变的原因,探讨炎症细胞动态变化在衣原体感染致不同人群病变差异的可能机制。【方法】用2×10~5 Inclusion forming units (IFUs)/小鼠的Cm剂量经子宫角(Intrauterine inoculation,iu)途径分别感染DBA/2J鼠和A/J鼠;在感染60 d处死两组小鼠,肉眼观察其输卵管水肿程度,显微镜下观察评估输卵管的扩张程度及炎症反应程度;每组小鼠在感染后3、7、14、21、28、35、42、49、56、60 d分别取阴道分泌物并检测其中衣原体包涵体的数量;在第14天每组各处死5只小鼠,检测上生殖道(输卵管及卵巢)组织匀浆中衣原体包涵体数量及炎症因子水平;同时,在3、28、35 d每组分别处死5只小鼠,显微镜下鉴定病变组织炎症细胞种类及变化。【结果】两组小鼠在感染60 d肉眼观察下的生殖道病变率有明显统计学差异,且两组小鼠病变组织的输卵管扩张程度也具有统计学差异,但炎症反应程度评分无统计学差异;DBA/2J与A/J两组小鼠在阴道分泌物的衣原体包涵体检测及小鼠阳性检出率中并无显著性差异;感染后14 d两组小鼠在上生殖道组织匀浆中的包涵体检出量无统计学差异,但某些炎症因子水平具有统计学差异;感染早期两组小鼠病变组织中嗜中性粒细胞浸润增加,但无明显差异,第28天DBA/2J小鼠病变组织中出现较多嗜酸性粒细胞,并在第35天与A/J小鼠形成统计学差异。【结论】DBA/2J与A/J小鼠在以iu方式感染等量Cm后,引起小鼠的生殖道病变差异可能与嗜酸性粒细胞参与的炎症反应有关。
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中文
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Chlamydia trachomatis plasmid-encoded protein pORF5 protects mitochondrial function by inducing mitophagy and increasing HMGB1 expression
作者：
Lei, Wenbo;Li, Qun;Su, Shengmei;Bu, Jichang;Huang, Qiulin;...
期刊：
Pathogens and Disease ,2017年75(9) ISSN：2049-632X
通讯作者：
Li, Zhongyu
作者机构：
[Li, Zhongyu; Bu, Jichang; Su, Shengmei; Lei, Wenbo; Li, Qun] Univ South China, Hunan Prov Cooperat Innovat Ctr Mol Target New Dr, Hunan Prov Key Lab Special Pathogens Prevent & Co, Inst Pathogen Biol,Med Coll, 28 Changsheng West Rd, Hengyang 421001, Hunan, Peoples R China.;[Huang, Qiulin] Univ South China, Affiliated Hosp 1, Dept Gen Surg, 69 Chuanshan Rd, Hengyang 421001, Hunan, Peoples R China.;[Li, Zhongyu] Univ South China, Coll Med, Inst Pathogen Biol, 28 Changsheng West Rd, Hengyang 421001, Hunan, Peoples R China.
通讯机构：
[Li, Zhongyu] U;Univ South China, Coll Med, Inst Pathogen Biol, 28 Changsheng West Rd, Hengyang 421001, Hunan, Peoples R China.
关键词：
Chlamydia trachomatis;pORF5 plasmid protein;mitochondrial function;mitophagy;apoptosis;HMGB1
摘要：
Chlamydia trachomatis, an obligate intracellular pathogen, has various effective strategies to regulate host cell death signalling pathways that ensure completion of their growth cycle. Mitochondrial autophagy (mitophagy) is responsible for elimination of dysfunctional and impaired mitochondria, and this process plays a critical role in cell survival via restriction of the mitochondrial apoptotic pathway. However, the specific molecular mechanisms are not entirely understood. In the present study, we observed that pORF5 plasmid protein of C. trachomatis plays a crucial role in attenuating mitochondrial dysfunction and apoptosis. Knockdown high mobility group box 1 (HMGB1) by lentivirus suppressed pORF5-induced mitophagy and increased apoptosis, implying that pORF5 may participate in cell death signalling pathways via up-regulation of HMGB1. Thus, we concluded that up-regulation of HMGB1 is a pivotal event for C. trachomatis that manipulates mitophagy and apoptosis in order to establish a favourable environment supportive of Chlamydial growth, which should further promote our understanding of Chlamydial pathogenic mechanisms.
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英文
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CBL+TBL双轨制医学微生物学实验教学理念研究
作者：
唐双阳;李乐;李忠玉;曾铁兵;余敏君;...
期刊：
山西医科大学学报 ,2016年18(11):905-907 ISSN：1007-6611
作者机构：
南华大学医学院病原学实验中心,衡阳,421001;南华大学公共卫生学院放射医学系;[李乐; 唐双阳; 曾铁兵; 李忠玉; 赵兰华; 余敏君; 申海燕] 南华大学
关键词：
医学微生物学;实验教学;教学改革
摘要：
医学微生物学实验课程是验证、巩固和补充课堂理论教学的必要环节,是培养医学生操作技能和创新能力的重要实践环节。文章在充分调研基础上提出了CBL＋TBL双轨制医学微生物实验教学理念,构建了新型实验教学课程体系,对师生角色进行了深入探讨,分层次开放教学科研实验室,完善优化实验教学保障体系,为创新科研型医学人才培养进行了有益的探索。
语种：
中文
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多层次综合性医学虚拟仿真实验教学中心的建设与成效分析
作者：
李忠玉;刘良专;梁瑜;周文化;何战胜;...
期刊：
实验技术与管理 ,2016年33(9):220-222 ISSN：1002-4956
作者机构：
南华大学医学院,湖南衡阳,421001;[何战胜; 李忠玉; 周文化; 刘良专; 陈熙; 梁瑜] 南华大学
关键词：
医学教育;虚拟仿真实验教学中心;建设与成效
摘要：
虚拟仿真实验教学在医学教育中发挥着重要作用。建立开放、资源共享的综合性医学虚拟仿真实验教学平台,是培养医学创新人才的主要途径。南华大学医学院通过建设医学虚拟仿真实验教学中心,开展了虚拟仿真实验教学,促进了学生实践创新能力的培养,提高了教学质量。
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The role of NOD1 and NOD2 in host defense against chlamydial infection
作者：
Zou, Yan;Lei, Wenbo;He, Zhansheng;Li, Zhongyu*
期刊：
FEMS Microbiology Letters ,2016年363(17) ISSN：0378-1097
通讯作者：
Li, Zhongyu
作者机构：
[He, Zhansheng; Li, Zhongyu; Zou, Yan; Lei, Wenbo] Univ South China, Pathogen Biol Inst, Sch Med, 28 Changshengxi Rd, Hengyang City 421001, Hunan, Peoples R China.
通讯机构：
[Li, Zhongyu] U;Univ South China, Pathogen Biol Inst, Sch Med, 28 Changshengxi Rd, Hengyang City 421001, Hunan, Peoples R China.
关键词：
NOD1;NOD2;chlamydia;host defense;inflammation;peptidoglycan
摘要：
Chlamydial species are common intracellular parasites that cause various diseases, mainly characterized by persistent infection, which lead to inflammatory responses modulated by pattern recognition receptors (PRRs). The best understood PRRs are the extracellular Toll-like receptors, but recent significant advances have focused on two important proteins, NOD1 and NOD2, which are members of the intracellular nucleotide-binding oligomerization domain receptor family and are capable of triggering the host innate immune signaling pathways. This results in the production of pro-inflammatory cytokines, which is vital for an adequate host defense against intracellular chlamydial infection. NOD1/2 ligands are known to derive from peptidoglycan, and the latest research has resolved the paradox of whether chlamydial species possess this bacterial cell wall component; this finding is likely to promote in-depth investigations into the interaction between the NOD proteins and chlamydial pathogens. In this review, we summarize the basic characteristics and signal transduction functions of NOD1 and NOD2 and highlight the new research on the roles of NOD1 and NOD2 in the host defense against chlamydial infection. © FEMS 2016. All rights reserved.
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沙眼衣原体pORF5质粒蛋白对HeLa细胞蛋白表达谱的影响
作者：
李忠玉;戴文婷;邹燕;雷文波;粟盛梅;...
作者机构：
[李忠玉; 戴文婷; 邹燕; 雷文波; 粟盛梅; 何战胜] 南华大学医学院病原生物学研究所
会议名称：
第十一届全国免疫学学术大会
会议时间：
2016-11-04
会议地点：
中国安徽合肥
关键词：
沙眼衣原体;同位素标记相对和绝对定量;差异蛋白
摘要：
目的:分析沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)质粒蛋白p ORF5基因转染He La细胞后所引起的蛋白表达谱的变化,为深入研究Ct的致病机制提供实验依据。方法:构建p ORF5基因慢病毒表达载体,与辅助质粒共转染293T细胞包装慢病毒颗粒,收集慢病毒后感染He La细胞,流式细胞技术多次分选筛选获得p ORF5基因稳定转染的He La细胞系和对照He La细胞系。采用同位
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体外传代选择对鼠衣原体质粒缺失株培养特性的影响
作者：
陈超群;任林;陆春雪;李忠玉;钟光明;...
期刊：
中南医学科学杂志 ,2016年44(4):384-389 ISSN：2095-1116
作者机构：
南华大学医学免疫学教研室/病原生物学研究所,湖南 衡阳,421001;南华大学附属第一医院检验科;南华大学病原生物学研究所;[钟光明] Department of Microbiology and Immunology，UTHSCSA，USA;[陆春雪; 李忠玉; 吴移谋; 陈超群] 南华大学
关键词：
鼠衣原体;质粒;体外传代;选择压力;下一代测序
摘要：
目的：探讨传代选择对鼠衣原体质粒缺失株CMUT3菌株培养特性的影响及其相应机制。方法采用“无辅助感染”和“辅助感染”交替方式体外传代培养CMUT3菌株,而后观察传代菌株和亲代感染细胞时的吸附效率以及对离心因素的依赖性,并利用下一代测序技术对传代菌株CMUT3G40和亲代CMUT3G0进行全基因组测序分析。结果传代菌株CMUT3G40在感染HeLa细胞时对离心因素依赖性降低,吸附试验表明CMUT3G40菌株对细胞的吸附能力增强；比较基因组学分析结果表明 CMUT3G40菌株与亲代 CMUT3G0在 tc0237基因存在差异, TC0237Q117E错义突变出现于CMUT3G40菌株基因组( CMUT3G40,99.7％；CMUT3G0,0％)。结论通过体外传代培养CMUT3菌株可获得吸附能力增强的菌株,该表型与传代选择所致的TC0237Q117E密切相关。
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沙眼衣原体pORF5质粒蛋白免疫优势片段的筛选与鉴定
作者：
何战胜;邹燕;粟胜梅;雷文波;李忠玉
期刊：
中国免疫学杂志 ,2016年32(1):59-64 ISSN：1000-484X
作者机构：
[何战胜; 邹燕; 粟胜梅; 雷文波; 李忠玉] 南华大学医学院病原生物学研究所, 特殊病原体防控湖南省重点实验室, 衡阳, 421001
关键词：
沙眼衣原体;pORF5质粒蛋白;免疫原性;免疫优势表位
摘要：
目的:鉴定沙眼衣原体pORF5质粒蛋白的免疫原性,并进一步筛选和确定pORF5质粒蛋白免疫优势片段。方法:以沙眼衣原体D血清型DNA为模板,设计pORF5基因全长和9个不同片段特异引物进行PCR扩增,PCR产物经BamH Ⅰ、NotⅠ双酶切后插入经同样双酶切的原核表达载体pGEX-6p中,构建pORF5质粒蛋白不同长度片段的原核表达重组体,重组体经PCR和测序鉴定后,转化XL1 Blue大肠杆菌表达10种不同长度的GST融合蛋白; ELISA方法检测pORF5质粒蛋白的免疫原性,Western blot鉴定pORF5质粒蛋白的免疫反应性; ELISA测定10个不同片段与沙眼衣原体生殖道感染患者血清、鼠免疫血清以及抗pORF5单克隆抗体的免疫反应性,鉴定pORF5质粒蛋白免疫优势片段。结果: pORF5质粒蛋白免疫原性强,能刺激机体产生高效价抗体;破坏pORF5质粒蛋白天然空间结构,其免疫反应性基本消失;在ELISA反应中,N端缺失66氨基酸的F6片段的免疫反应强度与pORF5全长基本相似,F2与F3出现较弱的免疫反应,其余片段免疫反应消失。结论: pORF5质粒蛋白为构象依赖性免疫优势抗原,其免疫优势表位和构象表位位于C端,本研究为进一步探讨pORF5质粒蛋白的生物学功能和疫苗的研制提供实验依据。
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Apelin-13 induces autophagy in hepatoma HepG2 cells through ERK1/2 signaling pathway-dependent upregulation of Beclin1
作者：
Huang, Qiulin* ;Liu, Xuan;Cao, Chao;Lei, Junyue;Han, Dong;...
期刊：
ONCOLOGY LETTERS ,2016年11(2):1051-1056 ISSN：1792-1074
通讯作者：
Huang, Qiulin;Li, Zhongyu
作者机构：
[Liu, Xuan; Chen, Guodong; Lv, Deguan; Han, Dong; Lei, Junyue; Huang, Qiulin; Cao, Chao; Yu, Jia] Univ South China, Affiliated Hosp 1, Dept Gen Surg, 69 Chuanshan Rd, Hengyang 421001, Hunan, Peoples R China.;[Chen, Linxi] Univ South China, Sch Med, Inst Pharm & Pharmacol, Hengyang 421001, Hunan, Peoples R China.;[Li, Zhongyu] Univ South China, Sch Med, Dept Microbiol, 28 Changsheng Rd, Hengyang 421001, Hunan, Peoples R China.
通讯机构：
[Huang, Qiulin; Li, Zhongyu] U;Univ South China, Affiliated Hosp 1, Dept Gen Surg, 69 Chuanshan Rd, Hengyang 421001, Hunan, Peoples R China.;Univ South China, Sch Med, Dept Microbiol, 28 Changsheng Rd, Hengyang 421001, Hunan, Peoples R China.
关键词：
expression levels;extracellular signal-regulated kinase 1/2;phosphorylation
摘要：
The aim of the present study was to investigate the effect of Apelin-13 on autophagy in hepatocellular carcinoma HepG2 cells and the underlying mechanism of the effect. The HepG2 cells were treated with Apelin-13 at a final concentration of 0.0001, 0.001, 0.01 and 0.1 μmol/l for 24 h. Cells were also treated with 10 μmol/l PD98059 for 24 h. The expression of the extracellular signal-regulated kinase (ERK)1/2, phosphorylated ERK1/2 (pERK1/2) and Beclin1 proteins were detected by western blot analysis. Beclin1 mRNA expression was also detected by reverse transcription-polymerase chain reaction. Autophagy was observed using fluorescence microscopy subsequent to monodansylcadaverine (MDC) staining. Following treatment with the various concentrations of Apelin-13, the expression of the ERK1/2 protein remained at a similar level, whereas the expression of pERK1/2 increased in a dose-dependent manner. Compared with the control group, the increase was significant (P<0.05). Similarly, Beclin1 expression was upregulated at the protein and mRNA levels by Apelin-13 treatment in a dose-dependent manner and was significantly increased compared with the control group. However, following treatment with the Apelin-13 inhibitor PD98059, the expression of pERK1/2, Beclin1 protein and Beclin1 mRNA were significantly decreased (P<0.05). In addition, Apelin-13 induced the autophagy of HepG2 cells in a dose-dependent manner, as revealed by MDC staining. PD98059 inhibited autophagy of HepG2 cells induced by Apelin-13. Therefore, Apelin-13 may promote autophagy in HepG2 cells by inducing the phosphorylation of ERK1/2 and upregulating the expression of Beclin1. © 2016, Spandidos Publications. All rights reserved.
语种：
英文
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虚拟仿真实验在医学微生物学实验教学中的应用体会
作者：
李忠玉;唐双阳;周洲;赵飞骏;朱翠明;...
期刊：
山西医科大学学报 ,2016年(2):135-136 ISSN：1007-6611
作者机构：
南华大学医学院医学微生物学教研室,衡阳,421001;[唐双阳; 李忠玉; 赵飞骏; 朱翠明; 曾焱华; 周洲] 南华大学
关键词：
医学微生物学;实验教学;虚拟仿真实验
摘要：
虚拟仿真实验教学是高等教育信息化建设的重要内容。虚拟仿真实验在医学微生物学实验教学中发挥重要作用，不仅可拓展由于实验室生物安全、经费和场地设施紧张等问题而不能开设的实验项目，开阔知识领域，而且可以强化学生实验基本技能和激发学生求知欲，对于培养学生的科学精神和创造性思维，提高专业技能均具有重要意义。
语种：
中文
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病原生物学数字化多元教学模式的构建
作者：
刘彦;吴移谋;李忠玉;赵飞骏;邹菊;...
期刊：
山西医科大学学报 ,2016年18(11):924-927 ISSN：1007-6611
作者机构：
南华大学医学院寄生虫学教研室,衡阳,421001;南华大学医学院微生物学教研室;南华大学医学院;南华大学护理学院;[邹菊; 李忠玉; 廖力; 吴移谋; 刘彦; 赵飞骏; 陈熙] 南华大学
关键词：
病原生物学;数字化平台;多元化教学模式;创新型人才
摘要：
在“以培养学生创新精神和能力为目标，理论与实践相结合、网络和课堂相结合、现代与传统相结合、课内和课外相结合”的理念指导下，构建数字化平台下的多元化教学模式，旨在提高学生的学习能力、创新精神和实践能力。该教学模式以教学应用为核心，融合现代多媒体教学手段和传统教学方法，实现教学场所、教学设备、教学内容、教学方法、教学手段的有效整合，形成课堂内外共同组成的、面向全体学生的、多角度、多层面的教学平台；并建立以课程组为中心、协调课堂内外学生学习环节的运作机制，更好地服务于学生，切实促进医学创新型人才的培养。
语种：
中文
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沙眼衣原体质粒蛋白pORF5相互作用宿主蛋白的筛选及鉴定
作者：
戴文婷;粟盛梅;龚思璐;邹燕;雷文波;...
作者机构：
[戴文婷; 粟盛梅; 龚思璐; 邹燕; 雷文波; 李忠玉] 南华大学医学院病原生物学研究所
会议名称：
中华医学会第十二次全国临床微生物学术年会暨第十一次全球华人临床微生物学与感染症学术年会
会议时间：
2015-08-06
会议地点：
中国甘肃兰州
摘要：
<正>目的筛选并鉴定与沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)质粒蛋白pORF5相互作用的宿主蛋白,为深入研究Ct的致病机制提供实验依据。方法构建pORF5基因慢病毒表达载体,与辅助质粒共转染293T细胞包装慢病毒颗粒,收集慢病毒后感染HeLa细胞,流式细胞技术多次分选筛选获得pORF5基因稳定转染的HeLa细胞系(pORF5-HeLa细胞系)和对照HeLa细胞系。采用同位素
语种：
中文
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沙眼衣原体pORF5质粒蛋白激活NALP3炎性复合体诱导THP-1细胞产生IL-1β和IL-18
作者：
曹文娟;戴文婷;杨晓玉;粟盛梅;龚思露;...
期刊：
中国免疫学杂志 ,2015年31(5):590-594 ISSN：1000-484X
作者机构：
南华大学医学院病原生物学研究所/特殊病原体防控湖南省重点实验室,衡阳,421001;[唐双阳; 龚思露; 李忠玉; 曹文娟; 杨晓玉; 贺红梅; 粟盛梅; 戴文婷; 周洲] 南华大学
关键词：
沙眼衣原体;pORF5质粒蛋白;NALP3炎性复合体
摘要：
目的：探讨沙眼衣原体（ Chlamydia trachomatis，Ct） pORF5质粒蛋白对IL-1β和IL-18等促炎性细胞因子的诱生作用，并初步分析其分子机制。方法：用0、3、6、12、24、36μg／ml不同浓度的pORF5蛋白刺激THP-1细胞，并于0、8、16、24、36 h收集上清及细胞，ELISA检测IL-1β和IL-18的含量；Realtime-PCR检测NALP3炎性复合体mRNA表达水平，Western blot鉴定Caspase-1活化状态；分别用NALP3 siRNA、ASC siRNA 转染THP-1细胞24 h或用Caspase-1特异性抑制剂（ Z-YVAD-FMK）预处理THP-1细胞30 min后，再用24μg／ml的pORF5质粒蛋白刺激THP-1细胞24 h，ELISA分析各处理因素对IL-1β和IL-18产生的影响。结果：pORF5质粒蛋白以浓度依赖的方式刺激THP-1细胞产生IL-1β和IL-18。当pORF5质粒蛋白浓度为24μg／ml时，IL-1β和IL-18的表达水平最高，分别为491 pg／ml、186 pg／ml；同时pORF5质粒蛋白以时间依赖的方式刺激THP-1细胞产生IL-1β和IL-18，两者分别在24 h和16 h达到峰值。 pORF5质粒蛋白可增强THP-1细胞NALP3、ASC 和Caspase-1 mRNA的表达，促进Caspase-1的活化；NALP3-siRNA、ASC-siRNA及Caspase-1抑制剂处理组IL-1β和IL-18的产生水平均显著低于对照组（ P＜0.05）。结论：pORF5质粒蛋白通过激活NALP3炎性复合体诱导THP-1细胞分泌IL-1β和IL-18。
语种：
中文
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Chlamydial plasmid-encoded virulence factor Pgp3 neutralizes the antichlamydial activity of human cathelicidin LL-37
作者：
Hou, Shuping;Dong, Xiaohua;Yang, Zhangsheng;Li, Zhongyu;Liu, Quanzhong;...
期刊：
Infection and Immunity ,2015年83(12):4701-4709 ISSN：0019-9567
通讯作者：
Zhong, Guangming
作者机构：
[Yang, Zhangsheng; Dong, Xiaohua; Hou, Shuping; Zhong, Guangming] Univ Texas Hlth Sci Ctr San Antonio, Dept Microbiol & Immunol, San Antonio, TX 78229 USA.;[Liu, Quanzhong; Hou, Shuping] Tianjin Med Univ, Gen Hosp, Dept Dermatovenereol, Tianjin, Peoples R China.;[Dong, Xiaohua] Hebei North Univ, Dept Pharmacol, Sch Pharm, Zhangjiakou, Hebei, Peoples R China.;[Li, Zhongyu] Univ South China, Dept Microbiol, Hengyang, Hunan, Peoples R China.
通讯机构：
[Zhong, Guangming] U;Univ Texas Hlth Sci Ctr San Antonio, Dept Microbiol & Immunol, San Antonio, TX 78229 USA.
摘要：
Chlamydia trachomatis infection in the lower genital tract can ascend to and cause pathologies in the upper genital tract, potentially leading to severe complications, such as tubal infertility. However, chlamydial organisms depleted of plasmid or deficient in the plasmid-encoded Pgp3 are attenuated in ascending infection and no longer are able to induce the upper genital tract pathologies, indicating a significant role of Pgp3 in chlamydial pathogenesis. We now report that C. trachomatis Pgp3 can neutralize the antichlamydial activity of human cathelicidin LL-37, a host antimicrobial peptide secreted by both genital tract epithelial cells and infiltrating neutrophils. Pgp3 bound to and formed stable complexes with LL-37. We further showed that the middle region of Pgp3 (Pgp3m) was responsible for both the binding to and neutralization of LL-37, suggesting that Pgp3m can be targeted for attenuating chlamydial pathogenicity or developed for blocking LL-37-involved non-genital-tract pathologies, such as rosacea and psoriasis. Thus, the current study has provided significant information for both understanding the mechanisms of chlamydial pathogenesis and developing novel therapeutic agents. © 2015, American Society for Microbiology.
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