作者： 胡永轩;肖建华;黄家芳;杨秋林

期刊： 中国热带医学,2006年6(7):1122-1124 ISSN：1009-9727

作者机构： 湖南南华大学病原生物学研究所,湖南,衡阳,421001;湖南湘南学院微生物与免疫教研室,湖南,郴州,423000;北京航天总医院,北京,100800

关键词： 日本血吸虫(中国大陆株);组织蛋白酶B;DNA疫苗;真核表达

摘要： 目的 克隆日本血吸虫组织蛋白酶B基因，构建真核表达重组质粒，转染真核细胞，观察其表达情况。方法用PCR技术从已构建好的重组质粒pBCSK＋／Sjcb2中扩增出Sjcb2基因片段，重组入克隆载体pUCm-T。再将Sjcb2基因片段亚克隆入真核表达载体pcDNA3．1（＋）。进行PCR、双酶切和DNA序列鉴定后，运用电穿孔技术将重组体pcDNA3．1（＋）／Sjcb2转染HeLa细胞，间接免疫荧光技术观察目的基因的表达。结果成功扩增出Sjcb2基因片段并构建DNA疫苗；重组质粒在HeIJa细胞中获得表达。结论Sicb2基因能够在体外真核细胞中表达。

语种： 中文

作者： 张彦丽;肖建华;韩福郎;王永东;尹卫国

期刊： 美国中华临床医学杂志,2006年008(02):155-158 ISSN：1527-9251

作者机构： 南华大学病原生物学研究所,湖南衡阳421001

关键词： 解脲支原体;MB抗原;表达;纯化

摘要： 目的 以解脲支原体1型培养液为模板，PER获得其MB抗原保守区部分基因，进行体外表达和纯化。方法用ExPasy网上软件Protscale分析Uu14个血清型的MB蛋白结构特点及抗原特性，选定14个血清型均在该蛋白同一保守区域有较好的抗原性，针对该序列设计特异性引物，并以UU血清1型DNA为模板进行PER，获得其MB抗原基因相应的片断，克隆入表达载体经测序鉴定后。在大肠杆菌中表达并纯化，以Western—blot鉴定表达产物。结果 准确扩增了解脲支原体1型MB抗原保守区基因片段，并在大肠杆菌中获得表达。结论 成功构建了pQE30／MB抗原部分保守序列的原核表达载体，在体外成功表达并纯化。表达和纯化的产物具有免疫反应性。

语种： 中文

作者： 曾桥;肖建华;万志刚;廖力;张愉快;...

期刊： 中国寄生虫学与寄生虫病杂志,2006年24(2):153-155 ISSN：1000-7423

通讯作者： Zeng, Q.

作者机构： [曾桥; 肖建华; 万志刚; 廖力; 张愉快; 刘传爱; 杨秋林] 南华大学病原生物研究所;南华大学病原生物研究所 衡阳421001

关键词： 日本血吸虫;cDNA文库;基因

摘要： 为检测日本血吸虫新基因Sj20.8作为核酸疫苗能否诱导小鼠产生保护性免疫作用,用PCR法扩增Sj20.8基因序列,构建重组质粒pcDNA3.1(-)/Sj20.8,肌肉注射免疫小鼠后检测发现,Sj20.8能在小鼠肌肉中短时间存在并有微弱表达,但未能诱导小鼠产生一定水平的保护性免疫.

语种： 中文

作者： 张艳;吴移谋;谭立志;朱翠明;胡四海;...

期刊： 山西医科大学学报,2006年8(4):337-339 ISSN：1007-6611

作者机构： 南华大学医学微生物学教研室,衡阳,421001

关键词： 医学微生物学;精品课程;教学方法

摘要： 课程建设是教学质量的中心环节,是衡量学校办学水平和教学质量的重要标志,是实现培养目标的基本保证。为做好医学微生物学精品课程的建设工作,从师资队伍、教学科研相结合、教学内容、教材建设、教学方法和手段、实践教学等方面进行了探讨和实践,取得了显著的成效。

语种： 中文

作者： 胡永轩;肖建华;杨秋林;黄家芳

期刊： 中国热带医学,2006年6(8):1330-1332 ISSN：1009-9727

作者机构： 湖南南华大学病原生物学研究所,湖南,衡阳,421001;湖南湘南学院微生物与免疫教研室,湖南,郴州,423000;北京航天总医院检验科,北京,100800;[杨秋林; 黄家芳; 肖建华] 南华大学;[胡永轩] 湘南学院

关键词： 日本血吸虫(中国大陆株);组织蛋白酶B肽链内切酶;原核表达

摘要： 目的 探讨日本血吸虫(Schistosoma japonicum,Si)中国大陆株(Chinese strain)组织蛋白酶B肽链内切酶基因(Cathepsin B endopeptidase)的原核表达载体pWR450-1的构建及表达情况. 方法 根据Genbank中Cathepsin B endopeptidase全序列(Genbank登录号为AY226984)设计特异性引物应用聚合酶链反应技术扩增基因全长,克隆入pUCm-T载体,酶切后亚克隆入原核表达载体pWR450-1并进行表达;利用SDS-PAGE及Western blotting观察日本血吸虫组织蛋白酶B肽链内切酶表达情况.结果 成功构建了Sjcb2/pWR450-1原核表达重组质粒,该重组质粒在大肠杆菌中可经IPTG诱导表达分子量约为86kD的融合蛋白,Western blotting分析表明,该融合蛋白能被兔阳性血清所识别.结论 日本血吸虫组织蛋白酶B肽链内切酶可在原核表达载体pWR450-1中表达,为研究其功能打下了必要的基础.

语种： 中文

作者： 胡永轩;肖建华;黄家芳;杨秋林

期刊： 中国寄生虫学与寄生虫病杂志,2006年24(5):385-386 ISSN：1000-7423

通讯作者： Hu, Y.X.

作者机构： [胡永轩; 肖建华; 黄家芳; 杨秋林] 湖南南华大学病原生物学研究所;湖南湘南学院微生物与免疫教研室郴州423000;北京航天总医院北京100800;湖南南华大学病原生物学研究所 衡阳421001

关键词： 日本血吸虫;组织蛋白酶B;DNA疫苗;真核表达

摘要： 构建日本血吸虫组织蛋白酶B肽链内切酶基因核酸疫苗,PCR、双酶切和DNA序列鉴定后,运用电穿孔技术将重组体pcDNA3.1(+)/Sjcb2转染Hela细胞,免疫细胞化学检测其能在HeLa细胞浆内表达,为抗日本血吸虫核酸疫苗的研制打基础.

语种： 中文

作者： 蔡恒玲;吴移谋;万艳平;肖建华;杨秋林;...

期刊： 中国病毒学：英文版,2005年20(5):464-467 ISSN：1674-0769

作者机构： 南华大学病原微生物学教研室,湖南,衡阳,421001;南华大学寄生虫教研室,湖南,衡阳,421001

关键词： SARS相关冠状病毒;S1基因;免疫活性;真核表达

摘要： 本研究根据GenBank登录的BJ01株SARS-CoV序列合成801bpS1基因片段,该片段被亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)得到重组质粒pcDNA3.1(+)/S1;转染Hela细胞,SDS-PAGE、Western-Blotting鉴定蛋白表达;肌注免疫BALB/c小鼠,利用ELISA法检测免疫后小鼠的抗SARS/CoVIgG及IFN-γ水平,MTT法检测T细胞增殖活性.结果显示,重组质粒pcDNA3.1(+)/S1可在Hela细胞内表达S1蛋白,免疫后小鼠的T细胞增殖活性增强,抗SARS-CoVIgG与IFN-γ水平升高.本实验说明pcDNA3.1(+)/S1可诱导小鼠产生一定的体液免疫和细胞免疫应答.

语种： 中文

作者： 梁瑜;肖建华;廖力;伍和平;张愉快;...

期刊： 中国病原生物学杂志,2005年18(3):203-205 ISSN：1673-5234

作者机构： 南华大学医学院寄生虫学教研室,湖南,衡阳,421001;[杨秋林; 刘传爱; 廖力; 伍和平; 张愉快; 肖建华; 梁瑜] 南华大学

关键词： 血吸虫;日本;磷酸甘油酸激酶;T/A克隆;序列分析

摘要： 目的获取日本血吸虫磷酸甘油酸激酶(SjPGK)编码基因片段,分析其核苷酸序列,为日本血吸虫病疫苗研制提供候选抗原分子.方法根据曼氏血吸虫磷酸甘油酸激酶(SmPGK) cDNA 序列设计1对引物,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法,从日本血吸虫成虫总RNA中扩增 SjPGK 基因片段.利用T/A克隆法,将其克隆入 pMD18-T 载体,经双酶切分析和 PCR 鉴定,将阳性克隆进行脱氧核糖核酸序列测定;运用Blast程序,将测序结果及其推导的编码氨基酸序列与NCBI 数据库在核苷酸水平和氨基酸水平进行同源性比较.结果 RT-PCR 特异性扩增出1条长约830 bp大小的条带;经酶切和PCR鉴定表明所构建的质粒pMD18-T-SjPGK中含有所扩增的基因序列;脱氧核糖核酸序列测定和分析,SjPGK 基因片段长为830 bp,与 SmPGK 的核苷酸同源性为85%,分值为 672;氨基酸同源性为94%,分值为473.结论成功克隆SjPGK 编码基因片段,为进一步实验提供了条件.

语种： 中文

作者： 曾桥;肖建华;万志刚;张愉快;刘传爱;...

期刊： 中国寄生虫学与寄生虫病杂志,2005年23(2):86-89 ISSN：1000-7423

通讯作者： Zeng, Q.

作者机构： [曾桥; 肖建华; 万志刚; 张愉快; 刘传爱; 杨秋林] 湖南省南华大学病原生物学研究所;湖南省南华大学病原生物学研究所 衡阳421001

关键词： 日本血吸虫;cDNA文库;表达序列标签;基因

摘要： 目的从日本血吸虫成虫cDNA文库中分离、鉴定和分析表达基因序列,为日本血吸虫病的防治提供侯选疫苗和药物靶点.方法构建日本血吸虫成虫cDNA文库,随机挑取重组阳性克隆进行测序,将获取的表达序列标签(Expressed Sequence Tag,EST)登录GenBank;对某些感兴趣的序列进行步移法测序获取全长cDNA,并进行生物信息学分析和登录.结果随机挑取382个阳性克隆进行测序,获得149个EST,同源性比较发现,部分序列与血吸虫的生活史的不同阶段和不同性别序列有一定的同源性.共获取18个日本血吸虫全长cDNA,大部分为管家基因,其中部分可作为日本血吸虫的候选疫苗分析和药物靶点.结论EST技术有助于快速、经济地获取日本血吸虫表达序列.

语种： 中文

作者： 樊华;肖建华;周晓东;刘锋;刘春秀

期刊： 中国高教研究,2005年(1):37-40 ISSN：1004-3667

作者机构： 南华大学研究生处培养办主任,湖南,衡阳,421001;[周晓东; 刘锋; 樊华; 刘春秀; 肖建华] 南华大学

关键词： 研究生课程;教学评估;改革和发展;教学基本要求;教师;教学质量;责任心;监督;采集;方法

摘要： 根据研究生课程教学基本要求与特点,在广泛调研、充分论证的基础上,对研究生课程教学评估指标体系的设计、评估数据的采集进行改革和优化,制定出科学合理、操作性强、适合我校校情的研究生课程教学评估方法.通过对研究生课程教学评估,推动我校研究生课程教学的改革和发展,增强教师的教学责任心,对保证研究生课程教学质量的提高起到重要的监督、指导作用.

语种： 中文

作者： 尹卫国;吴移谋;谭立志;肖建华;杨秋林;...

期刊： 中国人兽共患病学报,2005年21(3):218-220,224 ISSN：1002-2694

作者机构： [尹卫国; 吴移谋; 谭立志; 肖建华; 杨秋林; 张文波; 曾桥; 万艳平] 湖南省南华大学病原生物学研究所;湖南省南华大学病原生物学研究所 衡阳421001

关键词： SARS冠状病毒;S1蛋白;原核表达;鉴定

摘要： 目的克隆SARS冠状病毒(SARS-CoV)S1基因片段,构建原核表达载体,并在宿主菌中诱导表达带组氨酸标记的融合蛋白.方法人工合成SARS-CoV S1基因片段,克隆至pUCm-T载体,经DNA序列分析和酶切后,将酶切片段亚克隆至原核表达载体pET-28b(+),重组子pET-28b/SARS-S1转化大肠杆菌ril,IPTG诱导表达,Western blot鉴定表达产物;纯化表达产物并用ELISA检测其抗原特异性.结果获得了主要以包涵体形式存在的32kD的目的蛋白,Western blot 鉴定其为带组氨酸标记的融合蛋白,ELISA证明其能与合成肽的抗体及病人血清中的SARS-CoV的抗体特异结合.结论成功构建了SARS-CoV S1基因的组氨酸标记表达载体pET-28b/ SARS-S1,并在ril中得到了高效表达 ;表达的S1蛋白具有较好的抗原特异性,便于免疫动物以获得特异抗体,为SARS-CoV的实验室快速诊断打下了基础.

语种： 中文

作者： 刘传爱;肖建华;梁瑜;廖力;张愉快;...

期刊： 实用预防医学,2005年12(1):20-22 ISSN：1006-3110

作者机构： 南华大学病原生物学实验中心,湖南,衡阳,421001;[刘传爱; 廖力; 曾桥; 张愉快; 肖建华; 梁瑜] 南华大学

关键词： 日本血吸虫;微管蛋白;序列分析;表达序列标签;引物步移法

摘要： 目的分离和鉴定日本血吸虫(Shistosomajaponicum,Si)新基因,为防治日本血吸虫病提供药物靶标或候选疫苗.方法构建日本血吸虫成虫cDNA文库,随机挑取重组阳性克隆进行测序,对部分序列进行引物步移法测序,获取其全长cDNA序列;采用生物信息学等技术对该cDNA序列进行开放阅读框(ORF)的寻找、编码氨基酸的推导、核苷酸和氨基酸同源性比较以及蛋白质二级结构的初步预测.结果获得了1个日本血吸虫新基因-微管蛋白基因,全长1 439∞,编码443个氨基酸,与肝片形吸虫微管蛋白基因具有79%的同源性.编码蛋白的理论分子量为7.2198 KDa,等电点为9.12;抗原表位可能位于cDNA序列373～396处.结论获得了日本血吸虫微管蛋白基因的全长cDNA序列,为该基因功能的实验性鉴定工作奠定基础.

语种： 中文

作者： 粟盛梅;肖建华;胡永轩;曾桥;黄家芳

期刊： 实用预防医学,2005年12(1):30-32 ISSN：1006-3110

作者机构： 南华大学病原生物研究所,湖南,衡阳,421001;[胡永轩; 曾桥; 黄家芳; 粟盛梅; 肖建华] 南华大学

关键词： 日本血吸虫;生物信息学;ATP合酶脂结合蛋白样蛋白

摘要： 目的利用生物信息学技术对已登录的日本血吸虫(Schistosomajaponicum,Si)中国大陆株(chnese strain)新基因-ATP合酶脂结合蛋白样蛋白(ATP synthaselipid-binding protein-like protein)基因结构和功能进行分析.方法使用NCBI,SAPS,TMHMM2.0,PsortⅡ,Protscale和Scanprosite等软件对新基因的结构和功能进行分析.结果通过Intemet在线分析和生物信息学软件分析,对新基因的结构和功能有了进一步的认识,日本血吸虫ATP合酶脂结合蛋白样蛋白基因编码122个氨基酸,分子量为12.7 kDa,等电点为9.41,为一跨膜蛋白,含有磷酸化位点和烷基化位点.结论生物信息学技术有利于日本血吸虫新基因的结构和功能研究.

语种： 中文

作者： 刘传爱;肖建华;刘彦;廖力;曾谷清

期刊： 中国血吸虫病防治杂志,2005年17(1):13-16 ISSN：1005-6661

作者机构： 南华大学病原生物学研究所,衡阳,421001;[刘传爱; 廖力; 刘彦; 曾谷清; 肖建华] 南华大学

关键词： 日本血吸虫;表达序列标签;鸟氨酸转氨酶

摘要： 目的运用表达序列标签(expressed sequence tag,EST)技术,从日本血吸虫成虫cDNA文库中筛选和鉴定日本血吸虫新基因鸟氨酸转氨酶.方法转化日本血吸虫成虫cDNA文库,随机挑取重组阳性克隆进行测序,获得EST;用NCBI站点的GenBank对所获得的新基因序列进行同源性检索;利用BLAST程序对同源性高的基因进行核苷酸和氨基酸水平的同源性比较;并利用pc-gene软件对其蛋白质结构进行初步分析.结果获得了1个日本血吸虫新基因鸟氨酸转氨酶基因(GenBank登录号:AY336497).该cDNA序列长1 677 bp,编码424个氨基酸,与Xenopuslaevis鸟氨酸转氨酶同源性为66%;编码蛋白的理论等电点为8.52;抗原表位可能位于cDNA序列795～846处.结论用EST寻找日本血吸虫新基因是一种可行的方法,所筛选到的日本血吸虫新基因与Xenopus laevis鸟氨酸转氨酶基因同源,为进一步研究该基因的全序列及功能作准备.

语种： 中文

作者： 黄家芳;肖建华;曾桥;胡永轩;万志刚

期刊： 中国血吸虫病防治杂志,2005年17(2):107-110 ISSN：1005-6661

作者机构： 南华大学病原生物学研究所,衡阳,421001

关键词： 日本血吸虫;DnaJ-类似蛋白;真核表达载体;核酸疫苗

摘要： 目的构建日本血吸虫Dna J-类似蛋白真核表达载体,以待进行动物实验观察其保护性免疫作用.方法在已构建的克隆载体 p Bluescript SK+/ Sj Dna J-类似蛋白(保存于日本血吸虫成虫cDNA文库中)的基础上,根据Dna J-类似蛋白基因序列设计一对引物,PCR扩增后与T载体连接, T/A克隆筛选后经EcoRⅠ和Xba Ⅰ双酶切,连接入真核表达载体pcDNA3.1(+),构建重组质粒并转化入DH5α,再进行重组基因鉴定.结果此重组体转入了完整的日本血吸虫 Dna J-类似蛋白基因.结论构建了日本血吸虫Dna J-类似蛋白真核表达载体.

语种： 中文

作者： 袁中华;张元钟;陈海利;肖建华;唐龙;...

期刊： 南华大学学报(社会科学版),2005年6(1):98-100+105 ISSN：1673-0755

作者机构： 南华大学,研究生处,湖南,衡阳,421001

关键词： 学位论文;质量;监控

摘要： 为了对研究生学位论文质量进行监控,文章通过设计<答辩成绩评定表>,对学位论文答辩过程进行第一次量化.然后,为了减少答辩委员会委员之间的误差,该课题构建了综合评价系统模式,对每位委员的评分进行整体描述.经过综合评价系统模型矩阵运算,计算评价结果F值和评价结果的模糊率,最后对本单位全体研究生进行客观评价.使用该方法,可以为评选优秀研究生、优秀学位论文等管理提供客观依据,以利于研究生的培养.

语种： 中文

作者： 蔡恒玲;吴移谋;万艳平;肖建华;杨秋林;...

期刊： 中华微生物学和免疫学杂志,2005年25(9):716-717 ISSN：0254-5101

作者机构： 421001,衡阳,南华大学病原微生物学研究所;[肖建华; 杨秋林] 南华大学寄生虫教研室;[陈丽丽] 南华大学公共卫生学院;[蔡恒玲; 吴移谋; 万艳平; 尹卫国] 南华大学病原微生物学研究所

关键词： SARS冠状病毒;真核表达载体;基因片段;活性测定;严重急性呼吸综合征;控制SARS

摘要： 严重急性呼吸综合征（severe acute respiratory syndrome,SARS）病原体是SARS冠状病毒（SARSCoV）,研究开发安全有效的SARS-CoV疫苗以控制SARS成为热点.经过对12株SARS冠状病毒基因序列比较,发现S蛋白的氨基酸突变率仅为0.23%,其较高的保守性为疫苗研究奠定了良好的基础,由此,S蛋白成为候选疫苗的重要靶位.pcDNA3.1（＋）是一种高效率的质粒型真核表达载体.本研究将SARS-CoV的S1基因片段连至真核表达载体pcDNA3.1（＋）,构建重组pcDNA3.1（＋）/S1并初步研究其免疫效果.[第一段]

语种： 中文

作者： 万志刚;肖建华;曾桥;张愉快

期刊： 中国病原生物学杂志,2005年18(4):282-284 ISSN：1673-5234

作者机构： 南华大学病原生物研究所,湖南衡阳,421001;[万志刚; 曾桥; 张愉快; 肖建华] 南华大学

关键词： 血吸虫;日本;BBC1基因;基因克隆;表达

摘要： 目的克隆和表达日本血吸虫BBC1(SjBBC1)基因,为寻找新的抗日本血吸虫感染候选抗原分子提供实验基础. 方法用PRIMER5.0引物设计软件自行设计引物,PCR扩增SjBBC1基因,将PCR产物纯化后与pUCm-T载体连接,经蓝白筛选﹑双酶切分析和PCR鉴定后,亚克隆入pQE30原核表达载体中.对原核表达产物进行SDS-PAGE和Western-blot鉴定. 结果 PCR扩增产物约为650 bp,与预期大小相符.将该基因克隆入原核表达载体pQE30,表达蛋白分子质量单位约为23.6 ku,并能被日本血吸虫感染兔血清识别. 结论构建了pQE30/SjBBC1原核表达重组体载体,表达了具有抗原性的BBC1抗原.

语种： 中文

作者： 万志刚;肖建华;曾桥;杨秋林;张愉快;...

期刊： 中南医学科学杂志,2004年32(3):275-277+297 ISSN：2095-1116

作者机构： [万志刚; 杨秋林; 曾桥; 杨胜; 张愉快; 肖建华] 南华大学

关键词： 日本血吸虫;cDNA文库;步移法;生物信息学

摘要： 目的从日本血吸虫(Schistosoma japonicum, Sj)成虫cDNA文库中获得并分析日本血吸虫新的蛋白基因,为日本血吸虫病的防治提供候选疫苗和药物靶点.方法构建日本血吸虫成虫cDNA文库,挑取重组阳性克隆进行测序,对部分序列进行步移法测序获取全长cDNA,并进行生物信息学分析和登录.结果获得了1个日本血吸虫新基因-BBC1基因(AY220747),长623 bp,编码184个氨基酸,其编码蛋白的理论分子量为60.8 kDa,等电点为5.13.结论步移法测序和生物信息学技术相结合有利于发现日本血吸虫新基因.

语种： 中文

作者： 王可耕;刘彦;肖建华;张愉快;刘传爱;...

期刊： 中南医学科学杂志,2004年32(2):155-157,163 ISSN：2095-1116

作者机构： [李小玲; 刘传爱; 刘彦; 王可耕; 曾谷清; 张愉快; 肖建华] 南华大学

关键词： 日本血吸虫;核酸疫苗;免疫应答;家兔

摘要： 目的初步检测日本血吸虫pcDNA3.1(+)/MLP(SJP)核酸疫苗是否诱导家兔免疫应答的产生.方法将24只新西兰家兔随机分为2组,每组12只;实验组每只家兔SJP的免疫剂量为500 μg/次,后腿肌肉注射,对照组注射空质粒pcDNA3.1(+),隔周免疫1次,共4次;于0周、8周、16周采血2 mL,制备血清,做环卵沉淀反应,并做血清抗体及细胞因子分析.结果实验组环卵沉淀反应0周结果阴性,第8、16周结果阳性,对照组家兔环卵沉淀反应结果阴性,实验组可诱导IgA、IgG1变化,诱生INF-γ应答.结论 SJP核酸疫苗免疫家兔可产生体液免疫及细胞免疫.

语种： 中文