作者： 钟苗;雷小勇

期刊： 免疫学杂志,2004年20(2):83-85,90 ISSN：1000-8861

作者机构： [钟苗; 雷小勇] 南华大学生命科学与技术学院药理学教研室

关键词： RNA沉默;基因组;免疫系统;抗病毒

摘要： 基因组是病毒入侵的敏感作用靶点.近年来发现的RNA沉默是普遍存在于真核生物的一种防御机制.RNA沉默作为基因组的免疫系统有几个特点:特异的作用于外来核酸;扩增外来核酸并产生强大的效应.后一特性在分子水平正得以揭示.近来研究表明,哺乳动物细胞RNAi介导的抗病毒治疗表现出了良好的应用前景.本文综述了RNA沉默作为基因组免疫系统的特性及在抗病毒治疗方面的研究进展.

语种： 中文

作者： 周四桂;徐立朋;廖端芳;雷小勇;严奉祥;...

期刊： 生理学报,2004年56(3):313-320 ISSN：0371-0874

通讯作者： Zhou, S.G.

作者机构： 南华大学药物药理研究所;南华大学药物药理研究所 衡阳 421001;[周四桂; 徐立朋; 廖端芳; 雷小勇; 严奉祥; 朱炳阳] 南华大学

关键词： 缺氧;细胞粘附分子;环孢霉素A;亲环素A;细胞外信号调节激酶

摘要： 为研究环孢霉素A(cyclosporin A,CsA)对缺氧/复氧诱导人脐静脉内皮细胞(ECV-304)与中性粒细胞粘附的影响,本工作以缺氧/复氧诱导粘附为模型,采用β-N-乙酰氨基己糖苷酶比色法检测粘附率,流式细胞术检测ECV-304细胞表面粘附分子E-选择素(E-selectin)、细胞间粘附分子-1(ICAM-1)的表达,Fenton反应测定活性氧(reactive oxygen species,ROS)的含量,West-em-blot法检测ECV-304细胞亲环素A(cyclophilinA,CyPA)、磷酸化及总细胞外信号调节激酶(ERK1/2)蛋白的表达.结果发现,ECV-304细胞经缺氧/复氧处理后,ROS释放增多,E-selectin、ICAM-1的表达上调,其表面中性粒细胞的粘附增加,CsA能显著抑制缺氧/复氧的上述作用.缺氧/复氧后,CyPA蛋白表达明显上调,ERK1/2显著活化,细胞总ERK1/2蛋白表达无明显改变.CyPA抑制剂CsA以及CyPA反义寡核苷酸均明显减轻缺氧/复氧诱导的ERK1/2激活,显著减少ECV-304细胞与中性粒细胞粘附.ERK1/2信号通路特异性阻断剂PD98059亦显著抑制ECV-304细胞与中性粒细胞的粘附.上述结果提示,CsA抑制缺氧/复氧诱导的ECV-304细胞与中性粒细胞粘附,并可能通过抑制ROS-Cyclophilin A-ERK1/2的信号转导途径实现.

语种： 中文

作者： 周四桂;徐立朋;廖端芳;雷小勇;严奉祥;...

期刊： 生理学报,2004年56(3):313-320 ISSN：0371-0874

通讯作者： Zhou, S.G.

作者机构： [朱炳阳; 雷小勇; 周四桂; 徐立朋; 严奉祥; 廖端芳] Institute of Pharmacy and Pharmacology, Nanhua University, Hengyang, Hunan 421001, China

关键词： 缺氧;细胞粘附分子;环孢霉素A;亲环素A;细胞外信号调节激酶

摘要： 为研究环孢霉素A(cyclosporin A,CsA)对缺氧/复氧诱导人脐静脉内皮细胞(ECV-304)与中性粒细胞粘附的影响,本工作以缺氧/复氧诱导粘附为模型,采用β-N-乙酰氨基己糖苷酶比色法检测粘附率,流式细胞术检测ECV-304细胞表面粘附分子E-选择素(E-selectin)、细胞间粘附分子-1(ICAM-1)的表达,Fenton反应测定活性氧(reactive oxygen species,ROS)的含量,West-em-blot法检测ECV-304细胞亲环素A(cyclophilinA,CyPA)、磷酸化及总细胞外信号调节激酶(ERK1/2)蛋白的表达.结果发现,ECV-304细胞经缺氧/复氧处理后,ROS释放增多,E-selectin、ICAM-1的表达上调,其表面中性粒细胞的粘附增加,CsA能显著抑制缺氧/复氧的上述作用.缺氧/复氧后,CyPA蛋白表达明显上调,ERK1/2显著活化,细胞总ERK1/2蛋白表达无明显改变.CyPA抑制剂CsA以及CyPA反义寡核苷酸均明显减轻缺氧/复氧诱导的ERK1/2激活,显著减少ECV-304细胞与中性粒细胞粘附.ERK1/2信号通路特异性阻断剂PD98059亦显著抑制ECV-304细胞与中性粒细胞的粘附.上述结果提示,CsA抑制缺氧/复氧诱导的ECV-304细胞与中性粒细胞粘附,并可能通过抑制ROS-Cyclophilin A-ERK1/2的信号转导途径实现.

语种： 中文

作者： 周四桂;雷小勇;廖端芳

期刊： 中华危重病急救医学,2003年15(3):159-162 ISSN：2095-4352

作者机构： [周四桂; 雷小勇; 廖端芳] 南华大学药物药理研究所;南华大学药物药理研究所 湖南衡阳421001

关键词： 缺氧;复氧;细胞黏附分子;缺氧预适应

摘要： 目的:观察缺氧预适应对缺氧/复氧后血管内皮细胞表面黏附分子的表达以及中性粒细胞-内皮细胞黏附的影响.方法:采用β-N-乙酰氨基己糖苷酶比色法检测黏附率;流式细胞术检测内皮细胞表面黏附分子E-选择素、细胞间黏附分子1(ICAM-1)的表达;苔盼蓝摄取法检测细胞存活率;常规生化法检测乳酸脱氢酶活性.结果:血管内皮细胞经缺氧/复氧处理后,苔盼蓝摄取率、乳酸脱氢酶活性均明显增高,E-选择素、ICAM-1表达明显上调,其表面中性粒细胞的黏附增加,缺氧预适应显著抑制缺氧/复氧的上述作用.结论:缺氧预适应通过调节内皮细胞表面黏附分子的表达,抑制缺氧/复氧诱导的内皮细胞-中性粒细胞黏附.

语种： 中文

作者： 雷小勇;张洹;何冬梅

期刊： 中国病理生理杂志,2003年19(2):194-197 ISSN：1000-4718

作者机构： 暨南大学医学院血液病研究所;暨南大学医学院血液病研究所 广东广州510632;现在的单位:南华大学基础医学院药物药理研究所;广东广州510632;[雷小勇] 南华大学

关键词： 反义寡核苷酸类;HL-60细胞;K562细胞;柔红霉素;药物敏感性

摘要： 目的:研究bcl-2反义寡核苷酸作用后,白血病细胞株HL60、K562细胞对柔红霉素(DNR)敏感性的影响.方法:MTT法测HL60、K562细胞中DNR的半数抑制率(IC50);免疫荧光标记观测细胞Bcl-2蛋白水平;用Hoechest33258和碘化丙锭双染色法及流式细胞仪检测细胞凋亡.结果:靶向bcl-2 mRNA蛋白编码区反义寡核苷酸(AS-ODN1)和靶向翻译起始区的反义寡核苷酸(AS-ODN2)分别与DNR联合作用于HL60细胞后DNR的IC50值分别为0.124±0.011、0.149±0.012,分别与不加寡核苷酸组DNR的IC50值(0.173±0.021)或无义寡核苷酸联用DNR的IC50值(0.180±0.023)相比有显著差异,P＜0.05.AS-ODN1和AS-ODN2分别与DNR联合作用于K562细胞后DNR的IC50值分别为0.078±0.007、0.079±0.008,分别与不加寡核苷酸组DNR的IC50值(0.106±0.011)或无义寡核苷酸联用DNR的IC50值(0.107±0.012)相比有显著差异,P＜0.05.AS-ODN1和AS-ODN2分别与DNR同时作用于HL60或K562细胞后抑制Bcl-2蛋白表达及诱导细胞凋亡率分别与单用DNR或无义寡核苷酸联用DNR相比有显著差异,P＜0.05.与AS-ODN2比较,AS-ODN1提高HL60细胞对DNR的敏感性作用要强些(P＜0.05).结论:靶向bcl-2 mRNA蛋白编码区反义寡核苷酸和靶向翻译起始区的反义寡核苷酸能增强HL60和K562细胞对DNR的敏感性.

语种： 中文

作者： 雷小勇;张洹;何冬梅

期刊： 中华内科杂志,2003年42(5):330-331 ISSN：0578-1426

作者机构： [雷小勇; 张洹; 何冬梅] 南华大学基础医学院药物药理研究所;510632

关键词： bcl—2反义核酸;柔红霉素;诱导;原代白血病;细胞凋亡;研究

摘要： 研究表明:bcl-2基因的过度表达可明显降低化疗药物引起的细胞凋亡,针对bcl-2 mRNA翻译起始部位的反义核苷酸可抑制许多肿瘤细胞中bcl-2的表达,促进细胞的凋亡,提高肿瘤细胞对化疗的敏感性[1].我们在前一阶段的研究中[2],已经在bcl-2 mRNA翻译起始区和蛋白编码区发现了2个有效反义作用靶点.本研究进一步观察这两个有效序列的反义寡核苷酸是否会增强柔红霉素(DNR)诱导原代培养的急性白血病(AL)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)的细胞凋亡,期望为白血病的治疗开辟一条新的途径.

语种： 中文

作者： 雷小勇;张洹;何东梅

期刊： 肿瘤学与转化医学：英文版,2003年2(1):36-38 ISSN：2095-9621

通讯作者： Zhang Huan

作者机构： [雷小勇] Institute of Pharmacy and Pharmacology, Nanhua University, Hengyang 421001, China;[张洹; 何东梅] Institute of Hematology, Jinan University, Guangzhou 510632, China

通讯机构： [Zhang Huan] I;Institute of Hematology, Jinan University, Guangzhou, China

关键词： Bcl-2;antisense peptide nucleic acid;antisense oligonucleotide;HL60 cells;apoptosis

摘要： Objective To study the differences and similarities of the antisense drugs with different structures on the biological functions of HL60 cells. Methods Cytotoxic effects were measured by cell viability assay. The expression levels of protein were assayed by immunofluorescence using fluoresce isothiocyanate label. The morphological changes in apoptotic cells were observed. Flow cytometric analysis of DNA fragmentation was also performed. Results Antisense peptide nucleic acid (PNA) targeting the coding region of the Bcl-2 mRNA could effectively inhibit the growth of HL60 cells, down-regulate the synthesis of Bcl-2 protein and induce apoptosis. After HL60 cells were treated with 10 μmol/L Bcl-2 antisense PNA or antisense oligonucleotide for 72 h respectively, apoptotic rates of HL60 cells were 17. 80 ± 1. 53 and 13. 17 ± 1. 12, respectively(P <0. 05). Conclusion Antisense PNA targeting the coding region of Bcl-2 mRNA may have stronger antisense effects than the antisense oligonucleotides and could induce apoptosis of HL60 cells.

语种： 英文

作者： 雷小勇;张洹;何冬梅

期刊： 白血病·淋巴瘤,2002年11(6):327-330 ISSN：1009-9921

作者机构： 暨南大学医学院血液病研究所;暨南大学医学院血液病研究所 广东广州510632现在南华大学基础医学院药物药理研究所;湖南衡阳421001;广东广州510632;[雷小勇] 南华大学

关键词： 反义寡核苷酸;足叶乙苷;白血病;细胞凋亡

摘要： 目的：研究bcl-2的反义寡核苷酸对足叶乙苷(VP(16)诱导原代培养的急性白血病(AL)细胞凋亡的影响。方法：用细胞计数法观察细胞的生存情况；用免疫荧光标记法通过流式细胞仪观测细胞bcl-2蛋白水平；用形态学观察及流式细胞仪检测细胞凋亡。结果：靶向bcl-2 mRNA翻译起始区与靶向蛋白编码区的两个反义寡核苷酸分别与VP(16)联合作用AL细胞48 h，细胞的生存受到明显的抑制，分别同无关寡核苷酸(NS-ODN)联合VP(16)组、单用VP(16)组进行比较，差异有显著性(P＜0.05)。这两个不同靶点的反义寡核苷酸分别与VP(16)联用，均能明显下调AL细胞bcl-2蛋白的表达，并且联合作用AL细胞48 h的凋亡细胞百分率分别与NS-ODN联合VP(16)组、单用VP(16)组进行比较，差异有显著性(P＜0.05)。结论：针对bcl-2 mRNA翻译起始区和蛋白编码区两个靶点的反义寡核苷酸能增强VP(16)诱导急性白血病细胞的凋亡。

语种： 中文

作者： 雷小勇;张洹;何冬梅

期刊： CANCER COMMUNICATIONS,2002年21(12):1301-1304 ISSN：1000-467X

通讯作者： Lei, X.Y.

作者机构： 暨南大学医学院血液病研究所;暨南大学医学院血液病研究所 广东广州510632;现在南华大学基础医学院药物药理研究所;广东广州510632;[雷小勇] 南华大学

关键词： 反义寡核苷酸;阿糖胞苷;白血病细胞;凋亡

摘要： 背景与目的:有研究证实,针对bcl-2mRNA翻译起始区和蛋白编码区的2个有效反义作用靶点的反义寡核苷酸能增强HL-60和K562细胞对阿糖胞苷(Ara-C)、柔红霉素、足叶乙甙的敏感性.本研究观察这两个新靶点的反义寡核苷酸对Ara-C诱导原代培养的急性白血病(AL)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)细胞凋亡的影响.方法:用细胞记数法观察细胞的生存情况;免疫荧光标记法通过流式细胞仪检测细胞Bcl-2蛋白水平;用姬姆萨染色法观察并用流式细胞仪检测细胞凋亡.结果:靶向bcl-2mRNA翻译起始区与靶向蛋白编码区的两个反义寡核苷酸分别与Ara-C联合作用AL、CLL细胞48h,细胞的活性受到明显的抑制,分别同无关寡核苷酸(NS-ODN)联合Ara-C组、单用Ara-C组进行比较,差异有显著性(P<0.05).这两个不同靶点的反义寡核苷酸分别与Ara-C联用均能明显下调AL、CLL细胞Bcl-2蛋白的表达,并且联合作用AL、CLL细胞48h的凋亡细胞百分率分别与NS-ODN联合Ara-C组、单用Ara-C组进行比较,差异有显著性(P<0.05).与靶向bcl-2mRNA翻译起始区的反义寡核苷酸比较,靶向蛋白编码区的反义寡核苷酸提高AL细胞对Ara-C的敏感性作用要强些(P<0.05).结论:针对bcl-2mRNA翻译起始区和蛋白编码区两个靶点的反义寡核苷酸能增强Ara-C诱导AL、CLL细胞的凋亡.

语种： 中文

作者： 易光辉;韦立新;盖鲁粤;杨和平;吴孟津;...

期刊： 中国动脉硬化杂志,1997年(01):27-31 ISSN：1007-3949

作者机构： 衡阳医学院分子生物学研究中心!衡阳;421001;中国人民解放军总医院病理科!北京;100853

关键词： 动脉粥样硬化;球囊损伤;细胞增殖;细胞凋亡;癌蛋白

摘要： 为探讨球襄损伤动脉后血管壁细胞增殖和凋亡与P53、Bcl-2、c－Myc和c－Fos等癌蛋白表达时相的关系．将贵州小型猪喂高胆固醇饲料合并球襄损伤诱导动脉粥样硬化病变，然后再行右髂动脉球襄血管成形术．水后1、3、8、14、30和90天，分别用抗增殖细胞核抗原抗体标记检测细胞增殖；用未端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP-生物素平移末端标记检测细胞凋亡；p53、Bcl-2、c－Myc和c－Fos蛋白表达的检测用特异性及单克隆抗体标记和用亲和素-生物素-过氧物酶结合过氧化物酶度物3-3’二氨基联苯胺对组织切片进行免疫组织化学染色．结果发现，内膜和中膜在损伤后第1、3和8天时增殖细胞核抗原阳性细胞百分率分别为224％对21．6％、27．8％对27．5％，30．6％对21．2％；生物素平移末端标记阳性细胞百分率分别为3．0％对0．9％，4．3％对1．4％、16．0％对1．9％。C－Myc和c－Fos蛋白表达增加，与增殖细胞核抗原的直线相关系数分别为0．6472和0．6362。内膜和中膜的Bcl-2蛋白表达下调，而P53蛋白表达上调，与生物素平移末端标记的直线相关系数分别为为-0．7538和0．8447。增殖细胞核抗原、生物素平移末端标记、C－Myc、c－Fos、Bcl－2和P53阳性细胞百分数在损伤与未损伤血管以及在内膜和中膜的检测结果均有所不同。结论提?

语种： 中文

作者： 焦鸿丽;雷小勇;杨和平

期刊： 中国动脉硬化杂志,1997年(03):226 ISSN：1007-3949

作者机构： 衡阳医学院分子生物学研究中心!衡阳;421001

语种： 中文