作者： 杨慧龄;肖建华;刘彦;杨秋林;张愉快;...

期刊： 中华传染病杂志,2003年21(5):324-326 ISSN：1000-6680

作者机构： [杨慧龄; 肖建华; 刘彦; 杨秋林; 张愉快; 刘传爱] 南华大学病原学研究中心;南华大学病原学研究中心 421001湖南省衡阳

关键词： 弓形虫属;原虫蛋白质类;克隆,分子;质料;序列分析;基因表达;重组,遗传

摘要： 目的构建弓形虫RH株pcDNA3.1(+)-GRA8真核表达重组质粒,为进一步DNA免疫做准备.方法用聚合酶链反应(PCR)从弓形虫RH株的基因组DNA中扩增编码致密颗粒蛋白(GRA8)的基因片段,纯化后重组入pUC-19克隆载体,再经含IPTG,XGal氨苄培养基蓝白筛选,挑选白色克隆酶切,低溶点琼脂糖纯化,回收目的基因亚克隆入pcDNA3.1(+),经氨苄培养基过夜培养挑选6个克隆提纯酶切,PCR鉴定和测序.结果从RH株基因组DNA中扩增出特异的GRA8基因片段,克隆成功pcDNA3.1(+)-GRA8重组质粒.测序表明GRA8这部分基因与GENEBANK相应基因序列完全一致.结论本结果为研究抗弓形虫核酸疫苗打下基础.

语种： 中文

作者： 刘彦;肖建华;廖力;梁瑜;张愉快;...

期刊： 中南医学科学杂志,2003年31(2):140-143 ISSN：2095-1116

作者机构： [廖力; 刘彦; 杨胜; 曾谷清; 张愉快; 肖建华; 梁瑜] 南华大学

关键词： PCR扩增;日本血吸虫;黏蛋白样蛋白;基因序列;血吸虫病;抗原

摘要： 目的体外扩增日本血吸虫中国大陆株黏蛋白样蛋白(SjMLP) 的部分基因序列.方法利用PCGENE软件查找SjMLP的抗原决定簇;特定寡核苷酸引物的设计与合成;TRIZOL抽提日本血吸虫成虫总RNA,RT-PCR扩增目的基因并进行DNA序列分析.结果RT-PCR特异性扩增出SjMLP编码区部分基因序列,大小为756bp,测序结果显示与曼氏血吸虫MLP高度同源.结论扩增到了SjMLP抗原编码区基因的部分序列,与Sm MLP高度同源.

语种： 中文

作者： 刘彦;肖建华

期刊： 寄生虫与医学昆虫学报,2003年10(2):123-128 ISSN：1005-0507

作者机构： 南华大学基础医学院寄生虫学教研室,湖南,衡阳,421001;[刘彦; 肖建华] 南华大学

关键词： 血吸虫;核酸疫苗;分子疫苗;亚单位疫苗

摘要： 血吸虫病(Schistosomiasis)对人畜危害极大,它的防治是当今血防工作中的一个急待解决的重要课题.目前不少学者倾向于寻求一种有效的血吸虫疫苗,作为综合防治中的主要措施之一,随着现代分子生物学及免疫学的发展,血吸虫疫苗已由灭活疫苗、减毒活疫苗和基因工程重组蛋白疫苗进展到核酸疫苗,这是一种新型疫苗,同分子疫苗一样,也属于一种亚单位疫苗.本文拟在核酸疫苗及其在血吸虫方面的研究进展方面做一综述.

语种： 中文

作者： 李闻文;贺辉;肖建华;万志刚;曾桥;...

期刊： 中华检验医学杂志,2003年26(9):567 ISSN：1009-9158

作者机构： 410078,中南大学湘雅医学院检验系微生物学免疫学教研室;[贺辉; 肖建华; 尤志刚; 曾桥] 南华大学基础医学院微生物学教研室;[李闻文; 余俊龙] 中南大学湘雅医学院检验系微生物学免疫学教研室

关键词： 解脲脲原体;四型MB抗原基因;克隆;测序;大肠埃希菌;基因表达;基因扩增;基因工程

摘要： 我们采用基因工程方法对解脲脲原体(Uu)标准株4型MB抗原基因进行体外扩增、测序及表达,为Uu疫苗和快速诊断试剂盒的研制奠定了基础.

语种： 中文

作者： 杨慧龄;肖建华;梁瑜;张愉快;刘传爱

期刊： 中华预防医学杂志,2003年37(1):29-32 ISSN：0253-9624

通讯作者： Yang, H.L.

作者机构： [杨慧龄; 肖建华; 梁瑜; 张愉快; 刘传爱] 南华大学病原学研究中心;南华大学病原学研究中心 421001湖南衡阳

关键词： 弓形虫属;克隆;微线体蛋白1;基因;测序;表达

摘要： 目的 构建弓形虫ZS2株pWR450-1－微线体蛋白1（MIC1）原核表达重组质粒，对MICI基因进行序列测定，并在不同大肠杆菌中表达。方法 用PCR技术从弓形虫ZS2株的基因组DNA中扩增编码MICI的基因片段，酶切，连接，重组入pWR450-1表达载体，再经含氨苄培养基筛选、酶切、PCR鉴定，进行序列测序后转化大肠杆菌TG－1、JM109（DE3）和DH5α。在不同菌体浓度及不同剂量异丙基－β－D－硫代半乳糖诱导下，用SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定MIC1融合蛋白的表达。结果 从ZS2株基因组DNA中扩增出特异的MIC1基因片段，克隆后获得pWR450-1/MIC1重组质粒，测序结果表明，MIC1这部分基因与弓形虫RH株相应基因序列完全一致，高度保守。该基因可在不同大肠杆菌中表达相对分子质量约70000的融合蛋白。结论 构建了弓形虫ZS2株pW450-1-MCI1重组质粒，为研究MIC1的结构与功能奠定了基础。

语种： 中文

作者： 杨胜;肖建华;张愉快;曾桥;杨秋林;...

期刊： 实用预防医学,2002年9(6):577-579 ISSN：1006-3110

作者机构： 南华大学病原实验中心;复旦大学遗传所;复旦大学遗传所 中国湖南衡阳421001;[应康; 唐蓉] 复旦大学;[杨秋林; 刘传爱; 王可耕; 曾桥; 杨胜; 张愉快; 肖建华] 南华大学

关键词： 鉴定;日本血吸虫;文库

摘要： 目的通过构建日本血吸虫成虫cDNA表达文库,免疫筛选全长目的基因,研究其结构和功能.方法采用TRIZOL试剂提取日本血吸虫成虫总RNA,Oligotex mRNA Midi Kit分离mRNA,并用Stratagene的建库试剂盒构建日本血吸虫cDNA表达文库.结果构建的日本血吸虫成虫cDNA表达文库容量为2×106puf/ml,扩增后文库的滴度为1.4×107pfu/ml.文库的重组率达到96%以上,插入片段平均长度为1.4kb.结论本文库可望用于日本血吸虫疫苗候选基因及诊断抗原分子的筛选.

语种： 中文

作者： 梁瑜;肖建华

期刊： 中国寄生虫学与寄生虫病杂志,2002年20(3):183-186 ISSN：1000-7423

通讯作者： Liang, Y.

作者机构： 南华大学北校区基础医学院病原生物学研究所,衡阳,421001;[肖建华; 梁瑜] 南华大学

关键词： 抗血吸虫生殖免疫;血吸虫病;血吸虫;性别特异性基因;研究现状

摘要： 血吸虫病呈全球性分布,严重危害人体健康,是当今世界上亟待解决的一个重要公共卫生问题.血吸虫致病的主要原因是性成熟雌虫大量产卵且沉积于肝脏及结肠等组织,形成虫卵肉芽肿,造成组织免疫病理损害[1].血吸虫成虫是少有的雌雄异体吸虫,雌雄合抱是雌虫性成熟关键,也是产卵前提.没有合抱的雌虫发育不全,生长迟缓,生殖系统不成熟,不能产卵;已经发育成熟的雌虫一旦与雄虫分离也会退化至不成熟状态.

语种： 中文

作者： 杨慧龄;肖建华;梁瑜;张愉快;刘传爱

期刊： 中南医学科学杂志,2002年30(2):111-114 ISSN：2095-1116

作者机构： [刘传爱; 张愉快; 肖建华; 杨慧龄; 梁瑜] 南华大学

关键词： 弓形虫;微线体蛋白1;部分基因原核表达;重组质粒;构建;鉴定;测序;克隆

摘要： 目的构建弓形虫ZS2分离株pWR450-1-MIC1原核表达重组质粒,为进一步表达及免疫做准备.方法用PCGENE软件分析MIC1基因可能的TB抗原表位,自行设计引物,用聚合酶链反应(PCR)技术从弓形虫ZS2分离株的基因组DNA中扩增编码微线体蛋白1(MIC1)的基因片段,经酶切、连接、重组入pWR450-1原核表达载体,再经含氨苄培养基筛选、酶切、PCR鉴定和测序.结果从ZS2分离株基因组DNA中扩增出特异的MIC1基因片段,克隆成功pWR450-1-MIC1重组质粒.测序表明MIC1这部分基因与RH株相应碱基序列完全一致,高度保守.为下一步表达及免疫奠定基础.

语种： 中文

作者： 万艳平;吴移谋;肖建华

期刊： 医学分子生物学杂志,2002年24(4):219-222 ISSN：1672-8009

作者机构： 南华大学基础医学院微生物学教研室,衡阳,421001;[万艳平; 吴移谋; 肖建华] 南华大学

关键词： 转录调控;细胞凋亡

摘要： Daxx是细胞核内的一种新型转录调控蛋白,它与早幼粒细胞性白血病蛋白(promyelocytic leukemiaprotein,PML)在体内相互作用共定位PML癌基因结构域(PML oncogenic domains,PODs).人Daxx(human Daxx,hDaxx)和PML作为PODs主要蛋白质,关系到PODs球状结构的形成、维持及其它蛋白质在该区的定位.hDaxx能结合Fas死亡结构域(death domain,DD),激活Jun氨基端激酶通路诱导细胞凋亡.hDaxx与PML、Fas等多种蛋白质相互作用,与细胞周期调节及凋亡相关,这将为某些疾病发病机理研究提供一定的理论与实验基础.

语种： 中文

作者： 肖建华;李明;毕惠祥;王萍;李英杰

期刊： 中国现代医学杂志,2000年10(4):23-25 ISSN：1005-8982

作者机构： 衡阳医学院微生物学教研室,衡阳,421001;第一军医大学热带病研究所,广州,510515

关键词： 恶性疟原虫;丝氨酸重复抗原;基因序列

摘要： 该文采用PCR方法特异性扩增恶性疟原虫海南株 （FCC - 1 HN）SERA基因片段 ,并将该基因片克隆于M 13噬菌体 ,用双脱氧链末端终止法进行测序 ,应用PCGENE软件对该基因序列进行了分析 ,结果显示该基因片段长度为 45 3bp ,A +T G +C为 2 .6∶1,符合恶性疟原虫结构基因的特点。同源性分析显示该基因在不同虫株间高度保守 ,我国FCC - 1 HN虫株SERA与B1、B2、B3（巴西 ）株及S16 （塞内加尔 ）株仅一个氨基酸不同 ,与FCR3（刚比亚 ）、FCBR（哥伦比亚 ）、及S14、S15 （塞内加尔 ）等其它虫株SERA基因序列完全一致。抗原表位预测分析显示该多肽N端和C端可能有抗原表位存在

语种： 中文

作者： 肖建华;李明;李英杰

期刊： 现代预防医学,2000年27(1):145-146,封三 ISSN：1003-8507

作者机构： 衡阳医学院微生物学教研室,衡阳421001;第一军医大学热带病研究所,广州510515

关键词： 恶性疟原虫;丝氨酸重复抗原;基因表达

摘要： 采用 PCR方法特异性扩增恶性疟原虫云南株 （PFD- 3/ YN）丝氨酸重复抗原基因片段 ,经基因序列测定后克隆于 p GEX- 4T- 1融合蛋白表达载体 ,并转化大肠杆菌 TG1。SERA基因与 p GEX- 4T- 1重组后能在大肠杆菌 TG1中表达一 45 KDa的融合蛋白 ,当工程菌 OD5 90 为 0 .8～ 1.0时 ,加入终浓度 1m mol/ L IPTG进行诱导 ,表达量较高。采用 dot- EL ISA对表达产物进行鉴定。结果表明 SERA融合蛋白能被抗 SERA单克隆抗体所识别。

语种： 中文

作者： 肖建华;李明;毕惠祥;王萍;李英杰

期刊： 中国寄生虫学与寄生虫病杂志,1999年17(3):143-145 ISSN：1000-7423

通讯作者： Xiao, J.

作者机构： [肖建华; 李明; 毕惠祥; 王萍; 李英杰] 第一军医大学热带病所

关键词： 恶性疟原虫;富含组氨酸蛋白II;基因测序

摘要： 云南株恶性疟原虫与7G8及D10虫株HRPII基因有不同程度的差异,3虫株间HRPII氨基酸序列同源性为70.3%,核苷酸序列同源性为68.6%。结论:云南株与7G8及D10虫株HRPII基因存在差异。

语种： 中文

作者： 肖建华;杨慧龄

期刊： 中南医学科学杂志,1999年(1):7-10 ISSN：2095-1116

作者机构： 衡阳医学院微生物学教研室;寄生虫学教研室

关键词： 恶性疟原虫;基因多态性

摘要： 采用ＰＣＲ方法扩增恶性疟原虫云南株（ＰＦＤ－３／ＹＮ）与海南株（ＦＣＣ－１／ＨＮ）富含组氨酸蛋白Ⅱ部分基因序列，对扩增片段进行了限制性内切酶分析及部分基因序列测定，用ＰＣＧＥＮＥ软件对恶性疟原虫ＰＦＤ－３／ＹＮ、７Ｇ８及Ｄ１０３个虫株部分ＨＲＰⅡ基因序列进行了比较分析。结果显示ＨＲＰⅡ在３个虫株间存在不同程度的差异，我国疟原虫虫株无ＨＲＰⅡ基因缺失突变现象。

语种： 中文

作者： 肖建华;毕惠祥

期刊： 寄生虫与医学昆虫学报,1999年006(1):18-23 ISSN：1005-0507

作者机构： 中国人民解放军第一军医大学热带病研究所

关键词： 恶性疟原虫;基因表达

摘要： 采用ＰＣＲ方法特划性扩增恶性疟原虫云南株（ＰＦＤ－３／ＹＮ）富含组氨酸蛋白Ⅱ基因，经基因序列测定后克隆于ＰＷＲ４５０－１融合蛋白表达载体，并转化大肠杆菌ＴＧ１。在不同菌株浓度及不同剂量ＩＰＴＧ诱导下检测ＨＲＰⅡ融合蛋白的表达。采用Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ及Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ分析对表达产物进行鉴定。结果显示ＨＲＰⅡ基因与ＰＷＲ４５０－１重组后大肠杆菌ＴＧ１中表达－６８ＫＤａ的融合蛋白，当工程菌ＯＤ５

语种： 中文

作者： 常哲;吴移谋;余敏君;肖建华;张艳

期刊： 中华传染病杂志,1999年17(4):259-260 ISSN：1000-6680

作者机构： [常哲; 吴移谋; 余敏君; 肖建华; 张艳] 衡阳医学院

关键词： 支原体感染;生殖系统感染;聚合酶链反应;诊断

摘要： 生殖支原体(Mg)与急、慢性非淋菌性尿道炎(NGU)、慢性前列腺炎、宫颈炎或盆腔炎、不育症等疾病[1]有关.Mg的生长极其缓慢,初代生长时间长,需要的营养成分复杂,从临床标本中分离培养Mg难度大,阳性率很低.血清学诊断因与肺炎支原体(Mp)有交叉反应而特异性差.为评价聚合酶链反应(PCR)方法检测Mg的可靠性,了解Mg在衡阳地区高危人群中的感染状况,我们在MgPa基因上选择了3对不同的引物,用PCR方法对泌尿生殖道感染患者的标本进行了Mg检测,现将结果报告如下.

语种： 中文

作者： 肖建华;李明;毕惠祥;王萍;李英杰

期刊： 寄生虫与医学昆虫学报,1999年(01) ISSN：1005-0507

作者机构： 衡阳医学院微生物学教研室;中国人民解放军第一军医大学热带病研究所

关键词： 恶性疟原虫;富含组氨酸蛋白Ⅱ;基因表达

摘要： 采用ＰＣＲ方法特异性扩增恶性疟原虫云南株（ＰＦＤ－３／ＹＮ）富含组氨酸蛋白Ⅱ基因，经基因序列测定后克隆于ｐＷＲ４５０－１融合蛋白表达载体，并转化大肠杆菌ＴＧ１。在不同菌体浓度及不同剂量ＩＰＴＧ诱导下检测ＨＲＰⅡ融合蛋白的表达。采用Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ及Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ分析对表达产物进行鉴定。结果显示ＨＲＰⅡ基因与ｐＷＲ４５０－１重组后在大肠杆菌ＴＧ１中表达一６８ＫＤａ的融合蛋白，当工程菌ＯＤ５９０为１．０～１．２时，加入终浓度１ｍｍｏｌ／ＬＩＰＴＧ进行诱导，表达量较高。Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析表明ＨＲＰⅡ基因表达产物能被抗ＨＲＰⅡ单克隆抗体所识别

语种： 中文

作者： 肖建华;李明

期刊： 实用预防医学,1999年(1):6-8 ISSN：1006-3110

作者机构： 衡阳医学院微生物学室;第一军医大学热带病研究所

关键词： 疟原虫;组氨酸蛋白Ⅱ;基因表达

摘要： 目的 在大肠杆菌中表达富含组氨酸蛋白Ⅱ，为抗疟疫苗研究及制备疟话诊断单克隆抗体提供实验材料。方法 采用ＰＣＲ方法特异性扩增恶性疟原虫云南株富含组氨酸蛋白Ⅱ部分基因，经基因序列测定后克隆于ｐＧＥＸ４Ｔ－１融合蛋白的表达，并用ｄｏ－ＥＬＩＳＡ对表达的产物进行了鉴定。结果 ＨＲＰⅡ基因与ｐＧＥＸ４Ｔ－１重组后在大肠杆菌ＴＧ１中表达－４１ｋＤａ的融合蛋白。

语种： 中文

作者： 肖建华;李明;李英杰

期刊： 中南医学科学杂志,1998年(3):253-257 ISSN：2095-1116

作者机构： 衡阳医学院微生物学教研室;第一军医大学热研所

关键词： 恶性疟原虫;环子孢子原虫;基因;基因多态性

摘要： 本文采用ＰＣＲ方法扩增了恶性疟原虫云南株环子孢子蛋白部分基因，将扩增的基因片断克隆于Ｍ１３测序载体进行了基因序列测定。用ＰＣＢＥＮＥ软件对恶性疟原虫不同虫珠ＣＳＰ基因序列进行了一系列比较分析。

语种： 中文

作者： 肖建华;李明;崔东;毕惠祥;王萍;...

期刊： 中国寄生虫学与寄生虫病杂志,1998年16(5):342-346 ISSN：1000-7423

通讯作者： Xiao, J.

作者机构： [肖建华; 李明; 崔东; 毕惠祥; 王萍; 李英杰] 第一军医大学热带病所

关键词： 恶性疟原虫;环子孢子蛋白基因;基因测序

摘要： 目的：测定我国恶性疟原虫环子孢子蛋白部分基因序列，了解我国虫株与其它虫株ＣＳ蛋白基因序列的差异。

语种： 中文

作者： 肖建华;李明

期刊： 中国病原生物学杂志,1998年(4):264-266 ISSN：1673-5234

作者机构： 衡阳医学院微生物学教研室;第一军医大学热带病研究所

关键词： 恶性疟原虫;丝氨酸重复抗原;基因序列

摘要： 用ＰＣＲ方法特异性扩增ＳＥＲＡ基因片段，并将该基因片段克隆于Ｍ１３噬菌体，用双脱氧链末端终止法进行测定，应用ＰＣＧＥＮＥ软件对该基因序列进行了分析，结果显示该基因片段长度为４５３ｂｐ，Ａ＋Ｔ／Ｇ＋Ｃ为２．６：１，符合恶性疟原虫结构基因的特点。同源性分析显示该基因在不同虫株间高度保守，我国ＰＦＤ－３／ＹＮ虫株ＳＥＲＡ基因片段仅及Ｂ１，Ｂ２，Ｂ３（巴西）株及Ｓ１６（塞内加尔）株在第６６７位氨基酸有不同

语种： 中文