期刊论文

Construction of eukaryotic expression vector of pGenesil-1-Atg7-shRNA

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实用预防医学

1006-3110

2014

21

4

385-387

10.3969/j.issn.1006-3110.2014.04.001

国家自然科学基金（81172712） 湖南省自然科学基金（11JJ6078） 湖南省教育厅优秀青年基金（09B087） 南华大学博士启动基金（2010XQD19）

本校为第一机构

目的 利用RNA干扰技术,构建pGenesil-1质粒载体介导靶向自噬基因Atg7的shRNA真核表达载体. 方法 根据GenBank中Atg7基因的cDNA序列（NM 001136031）,设计有小发卡结构的三条寡核苷酸序列,连接到空载体pGenesil-1中,转化到JM109菌株,选取阳性克隆,进行酶切鉴定和DNA测序分析. 结果 经双酶切结果显示合成的shRNA序列成功连接到pGenesil-1质粒载体中,DNA测序结果证实干扰序列和目的序列相同,重组载体pGenesil-1-Atg7-shRNA构建成功. 结论 成功构建干扰人Atg7基因的重组表达载体,为研究Atg7蛋白的生物学功能提供了研究基础.

Objective To construct the eukaryotic expression vector expressing short hairpin RNA （shRNA） section targeting human Atg7 gene by using RNA interference.Methods According to the sequence of human Atg7 cDNA （GenBank：NM-001136031）,three oligonucleotides of shRNA were designed and cloned into pGenesil-1 plasmid which had then been transformed into JM109 E.coli.The positive results were chosen to be cloned and the positive clones were digested with restriction endonuclease for identification and DNA sequencing.Results Restriction endonuclease ...