期刊论文

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微量元素与健康研究

1005-5320

2016

33

3

1-4

14JJ3104:湖南省自然科学基金 2014KS22:湖南省衡阳市科技局项目 2014XQD40:南华大学博士启动基金

本校为第一机构

目的：构建绿脓杆菌外毒素PE融合抗TRAIL DR5单链抗体基因TRAIL DR5/Sc Fv的原核表达载体,诱导表达,并检测其生物学功能。方法：根据TRAIL DR5单链抗体HGS-ETR2的氨基酸序列,优化密码子,合成全长的编码序列作为模板,PCR技术扩增TRAIL DR5/Sc Fv基因,基因重组技术将两段TRAIL DR5/Sc Fv与PE25基因连接,组成TRAIL DR5/Sc Fv-PE25融合基因。重组质粒转化E.coli BL21（DE3）,离子交换层析和亲和层析技术纯化重组蛋白。WST-8技术检测细胞毒性。结果：成功构建了重组免疫毒素基因TRAIL DR5/Sc Fv-PE25,重组蛋白经纯化后,每升发酵液可得到4.95 mg融合蛋白（纯度95%）,该融合蛋白具有抑制A431/H9和Panc ...

Objective：To construct recombinant immunotoxin TRAIL DR5/ScFv- PE25 and to explore its biological properties. Methods： According to the amino acids sequence of TRAIL single- chain antibody （HGS - ETR2）, its related DNA sequence as template, TRAIL DRS/ScFv gene was amplified by PCR. TRAIL DRS/ScFv fused with PE25 gene, a truncated form of pseudomonas exotoxin A （PEA）, via a flexible peptlde was constructed. The immunotoxin fusion protein （TRAIL DRS/ScFv- PE25） was expressed in E. coil strain BL21 （DE3） and purified. The cell cytotoxlcl...