期刊论文

pORF5 plasmid protein of Chlamydia trachomatis regulates the secretion of IL-1βthrough activation of p38MAPK and NALP3signaling pathways

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中国病原生物学杂志

1673-5234

2018

13

2

146-151

10.13350/j.cjpb.180209

国家自然科学基金项目（No.81772210,31470277,81102230） 2017年地方高校国家级大学生创新创业训练计划项目（教高司函[2017]40号） 2017年度湖南省大学生研究性学习和创新性实验计划项目（湘教通[2017]205号） 特殊病原体防控湖南省重点实验室项目（No.2014-5） 湖南省高等学校“分子靶标新药研究”协同创新中心资助项目（No.2014-405）

本校为其他机构

目的研究沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)pORF5质粒蛋白诱导THP-1细胞产生IL-1β的分子机制,为阐明Ct致病机制提供实验依据。方法将原核表达重组体pGEX-6p/pORF5转化大肠埃希菌,表达并纯化GST-pORF5融合蛋白,融合蛋白经蛋白酶酶切后制备不含GST标签的pORF5蛋白;用不同浓度的pORF5蛋白体外刺激THP-1细胞,ELISA测定不同时间IL-1β水平;分别用NALP3 siRNA、ASC siRNA、Caspase-1抑制剂和p38抑制剂预处理THP-1细胞,再用pORF5蛋白刺激THP-1细胞24h,ELISA测定IL-1β含量,Real-time PCR测定IL-1β和NALP3炎性体mRNA的表达,Western blot分析Caspase-1的表达及p38磷酸化水平。结果pORF5蛋白以剂量和...

Objective To investigate the molecular mechanism of 1 L-1βproduction induced by the pORF5 plasmid protein of Chlamydia trachomatis in THP-1 cells to lay the foundation for further study of the pathogenesis of C.trachomatis. Methods A pGEX-6 p/pORF5 prokaryotic expression vector was transformed into E.coli to express the fusion protein GST-pORF5.The fusion protein was digested with protease to yield pORF5 protein without the GST tag.pORF5 protein was used to stimulate THP-1 cells at different concentrations and different time points,and IL-1βw...