期刊论文

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中国人兽共患病学报

1002-2694

2011

27

6

539-542,546

10.3969/j.issn.1002-2694.2011.06.019

国家“十一五”重大传染病防治科技重大专项“结核病传播模式研究”(2008ZX100/03-010-02)资助；

本校为第一机构

目的 利用pJV53质粒编码的分枝杆菌重组工程系统将TAP标签敲入耻垢分枝杆菌基因组。方法 将pJV53质粒转入耻垢分枝杆菌,使其表达重组蛋白,制备带有重组蛋白的感受态细胞;从质粒pBS1479中扩增出tap片段,从质粒 pSMT3中扩增hyg片段,从耻垢分枝杆菌基因组中分别扩增出aasf基因及其5′端非编码区片段AASF5和aasf基因下游3′端非编码区片段AASF3,利用重叠PCR将以上4个片段拼接在一起,形成最终的敲入片段A5THA3;将构建好的敲入片段转入感受态细胞,使其重组入耻垢分枝杆菌基因组中,PCR和DNA测序鉴定敲入效果。结果 重叠PCR技术得到全长为 3 200 bp的敲入片段,PCR与DNA测序结果证实带有TAP标签的A5THA3片...

In order to knock the TAP tag in the genome of Mycobacterium smegmatis （M. smegmatis） mc^2 155 using the pJV53 plasmid encoding recombineering system, pJV53 plasmid was transformed into M. smegmatis mc^2 155 to make the M. smegmatis mc^2 155 express recombinant proteins and prepare the electrocompetent cells. The tap gene was amplified from pBS1479 plasmid and the hyg gene was amplified from pSMT3 plasmid. The aasf （anti-anti-sigma factor）gene with AASF5 fragment （5′-noneoding region of aasf gene） and AASF3 fragment （3′-noncoding regio...