期刊论文

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现代生物医学进展

1673-6273

2010

10

17

3212-3215

10.13241/j.cnki.pmb.2010.17.002

国家自然基金青年项目资助课题（30800474） 湖南省教育厅资助课题（09C832） 湖南省教育厅资助课题（088065）

本校为第一机构

目的:构建编码Smad4 mRNA的shRNA真核表达载体,并筛选出基因沉默效果最明显的shRNA质粒表达载体。方法:根据GenBank提供的人Smad4基因的mRNA序列构建2个shRNA质粒表达载体和1个阴性对照质粒表达载体,并通过基因测序进行鉴定。经鉴定后转染体外培养人成纤维细胞,western-blot检测Smad4蛋白水平抑制表达效果。结果:构建质粒表达载体测序结果显示,插入片段测序结果与合成的shRNA序列一致;靶向Smad4基因shRNA质粒表达载体对所转染的人成纤维细胞中Smad4蛋白水平表达均有抑制作用,其中shRNA1最为明显。结论:成功构建了靶向Smad4基因shRNA质粒表达载体,其中抑制Smad4基因表达效果最为明显的是shRNA1,为...

Objective：To construct a plasmid expression vectorcoding forthe short hairpin RNA（shRNA）targeting Smad4 mRNA.Methods：Two plasmid expression vectors coding for shRNA targeting Smad4 gene sequence and a control vector containing random DNA fragment were constructed.The recombinant plasmids were identified by Sequencing,and then transfected separately into Fibroblast cells expressing Smad4 gene via ViofectTM reagent.The Smad4 gene silencing effect was detected by Western blotting.Results：Sequence analysis of inserted fragment revealed the sam...