期刊论文

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中国免疫学杂志

1000-484X

2018

34

3

321-324,330

10.3969/j.issn.1000-484X.2018.03.001

(81772210、31470277):国家自然科学基金 (教高司函[2017]40号):2017年地方高校国家级大学生创新创业训练计划项目 (湘教通[2017]205号):2017年度湖南省大学生研究性学习和创新性实验计划项目 (2014-5):特殊病原体防控湖南省重点实验室 (2014-405):湖南省高等学校"分子靶标新药研究"协同创新中心

本校为第一机构

目的:探讨沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct) pORF5蛋白对细胞凋亡的影响,并进一步分析其分子机制,为阐明Ct致病机制提供实验依据。方法: pGEX-6p /pORF5重组质粒转化XL1-blue大肠杆菌,IPTG诱导表达GST-pORF5融合蛋白,融合蛋白经谷胱甘肽琼脂糖凝胶4B纯化及蛋白酶切除GST标签后得到pORF5蛋白。用不同浓度的pORF5蛋白刺激HeLa细胞,Western blot检测不同时间Bax和Bcl-2的表达水平以及PI3K/Akt磷酸化水平,Hoechst 33342及流式细胞技术分析细胞凋亡情况;HeLa细胞经PI3K/Akt特异性抑制剂LY294002预处理1 h后,再用pORF5蛋白刺激24 h,测定细胞凋亡率,并进一步分析凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达水平...

Objective:To study the relationship between apoptosis and the pORF5 protein of Chlamydia trachomatis,and further to explore its molecular mechanisms,which could lay a foundation for chlamydial pathogenic mechanisms. Methods:pGEX-6p /pORF5 recombinant expression vector was transformed to XL1-blue E. Coli to express GST-pORF5 fusion protein,and GST-pORF5 fusion protein was purified with Glutathione Sepharose 4B Beads,and cleaved to get pORF5 protein without GST tag by PreScission protease. The pORF5 protein was used to stimulate HeLa cells at dif...