专利

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2018-01-23

CN201810065431.4

2018-08-17

CN108410895A

421001 湖南省衡阳市蒸湘区常胜西路28号

包晓静

重庆市信立达专利代理事务所(普通合伙) 50230

本校为第一完成单位

1.一种提高重组DNA片段转化大肠杆菌效率的方法,其特征在于,所述提高重组DNA片段转化大肠杆菌效率的方法将PCR扩增得到的EGFP片段与pUC18质粒双酶切,用T4DNA连接酶对酶切后的EGFP片段和pUC18质粒进行连接,得到连接产物；DNA连接产物中加入1/5连接产物体积的10M醋酸铵；然后加入上述混合物2倍体积的无水乙醇,室温静置25min#1hr,10000g离心25min#1hr；弃上清,加入5#10μL#0.1M#CaCl2,溶解管底的沉淀。

本发明属于基因工程技术领域,公开了一种提高DNA重组片段转化大肠杆菌效率的方法,即将PCR扩增得到的EGFP片段与pUC18质粒分别进行双酶切,用T4DNA连接酶对酶切后的EGFP片段和pUC18质粒进行连接,得到连接产物；DNA连接产物先加入1/5DNA连接产物体积的10M醋酸铵；然后加入上述混合物两倍体积的无水乙醇,室温静置25min#1hr,10000g离心25min#1hr；弃上清,加入5#10μL#0.1M#CaCl2,溶解管底的沉淀。本发明转化得到的大肠杆菌单克隆数目约是未处理组的2#10倍；本发明减少了转化时感受态大肠杆菌的使用量。