目的:PCR 扩增小鼠 LIGHT 胞外段基因(LIGHTECD),构建含 LIGHTECD的原核表达载体,诱导表达重组蛋白,并免疫新西兰兔,制备多克隆抗体。方法:提取小鼠骨髓来源的未成熟树突状细胞中的总 mRNA,RT-PCR 技术扩增 LIGHTECD,克隆至原核表达质粒 pGEX-6P-2中,构建重组表达载体pGEX-6P-2-LIGHTECD。重组质粒进行 PCR 和基因测序鉴定后,转化大肠杆菌 XL-1 Blue,IPTG 诱导表达。融合蛋白纯化后纯化后免疫新西兰兔,ELISA 及Western- blot 分析兔血清中抗 LIGHTECD抗体的效价和特异性。结果:RT-PCR 扩增得到525 bp LIGHTECD目的片段;经 PCR 和测序鉴定,证明构建的重组质粒中插入的片段为 LI...