专利

发明专利

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2018-08-06

CN201810884350.7

2018-12-14

CN108998474A

421000 湖南省衡阳市石鼓区船山路69号

湖南

本校为第一完成单位

1.一种建立miR‑32‑5p基因敲除小鼠模型的方法，其特征在于，所述的方法包括如下步骤：(1)确定miR‑32‑5p基因的特异性靶位点sgRNA1、sgRNA2和sgRNA3；所述miR‑32‑5p的sgRNA1靶序列如SEQ ID NO.1所示，sgRNA2靶序列如SEQ ID NO.2所示，sgRNA3靶序列如SEQ ID NO.3所示；(2)将C57/BL6雌性小鼠促排卵和体外受精；(3)将步骤(1)所述的sgRNA1、sgRNA2和sgRNA3与Cas9核酸酶mRNA体外转录后，显微注射到受精卵中，将受精卵移植到***母鼠子宫，繁育得到F0代小鼠，对其进行剪尾，提取DNA进行测序；(4)将F0代阳性小鼠与野生型小鼠交配繁育得到F1代杂合子小鼠；(5)将F1代杂合子小鼠杂交获得F2代纯合子小鼠，即为miR‑32‑5p基因敲除小鼠模型。

本发明公开了一种建立miR‑32‑5p基因敲除小鼠模型的方法及应用。将miR‑32‑5p的三个sgRNA与Cas9核酸酶mRNA体外转录后，注射到受精卵中，获得miR‑32‑5p基因敲除小鼠。miR‑32‑5p敲除小鼠具有抗炎性疼痛、抗抑郁和抗血管钙化能力。本发明首次使用CRISPR/Cas9基因敲除技术，建立miR‑32‑5p敲除的小鼠动物模型，为研究miR‑32‑5p在神经系统及血管病变进程中的作用提供可靠、稳定的动物模型。