目的:构建幽门螺杆菌脂蛋白Lpp20基因的真核表达载体pcDNA3.1(+)/Lpp20,并在HeLa细胞中进行表达。通过肌肉注射免疫C57BL/6小鼠,观察其所产生的体液免疫和细胞免疫应答水平,为研制高效、新型的幽门螺杆菌核酸疫苗提供实验依据。
方法:用PRIMER5.0软件设计引物,PCR扩增Lpp20全基因;将PCR产物纯化后插入pGEX-6P-2载体,将重组质粒pGEX-6P-2/Lpp20转化入表达宿主菌BL21(DE3)进行诱导表达,纯化重组蛋白并分析其免疫反应性。再将Lpp20基因克隆至pcDNA3.1(+)真核细胞表达载体构建pcDNA3.1(+)/Lpp20重组体,并转染HeLa细胞,用免疫细胞化学及Western-blot观察鉴定其在真核细胞得到表达后,...