期刊论文

Subcellular Localization and Transcriptional Activity Analysis of Full-length Human SMAD4 and Its Splicing Variants in HEK-293T Cells

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生命科学研究

1007-7847

2021

25

02

95-101

10.16605/j.cnki.1007-7847.2020.05.0179

国家自然科学基金资助项目（81602249）； 湖南省教育厅优秀青年项目（19B500）； 衡阳市科技局项目（2017KJ287）； 2019年湖南省大学生创新创业训练计划项目（2295）； 2020年湖南省研究生科研创新项目（CX20200957）； 南华大学大学生创新创业训练计划项目（2017XJXZ028,X2018186,X2019156）；

本校为第一机构

为了观察人SMAD4全长及剪接体在HEK-293T中的亚细胞定位,并分析它们在HEK-293T细胞中的转录活性差异,将SMAD4全长及剪接体的pEGFP-C1重组质粒转染至HEK-293T细胞中,在荧光显微镜下观察含GFP标签的SMAD4全长及其剪接体蛋白的亚细胞定位,并通过双荧光素报告酶实验在HEK-293T细胞中对SMAD4全长及其剪接体激活SBE报告基因的情况进行比较。亚细胞定位观察显示,与pEGFP-C1空载组中GFP在HEK-293T中呈现核质均匀分布不同, GFP-SMAD4和GFP-SMAD4△4、GFP-SMAD4△6、GFP-SMAD4△5-6、GFP-SMAD4△4-6、GFP-SMAD4△4-7五种剪接体均分布于HEK-293T的细胞质中;而GFP-SMAD4△3则主要分布于HEK-293T的细胞核中。...

To observe the subcellular localization of full-length and splicing variants of human SMAD4 and analyze their transcriptional activity,pEGFP-C1 recombinant plasmids containing SMAD4 full-length gene and splicing variants were transfected separately into HEK-293T cells,and the subcellular localization of the GFP-tagged SMAD4 and its splicing variants was observed. Activation of SMAD binding element(SBE)by full-length SMAD4 and splicing variants in HEK-293T cells was compared using dual-luciferase reporter experiment. The fluorescence results sho...