期刊论文

Construction and identification of RNAi vectors for RNA interference of human death domain associated protein

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生物技术

1004-311X

2018

28

4

341-344,371

10.16519/j.cnki.1004-311x.2018.04.0059

国家自然科学基金项目（“人乳头瘤病毒16型E2蛋白对Daxx调控细胞凋亡的影响”,No.81402169） 湖南省自然科学基金项目（“Daxx对人乳头瘤病毒16型E2蛋白转录调控E6和E7的影响”,No.2018JJ3452） 特殊病原体防控湖南省重点实验室资助项目（湘科计字[2014]5号） 湖南省分子靶标新药研究协同创新中心资助项目（湘教通[2015]351号）

本校为第一机构

[目的]构建人死亡结构域相关蛋白（hDaxx）的干扰载体,为研究hDaxx在HPV致宫颈癌发生与发展过程中的作用提供实验基础。[方法]以hDaxx全基因序列为模板,设计hDaxx RNA干扰引物并扩增干扰片段,将其连接到pGPU6/GFP/Neo真核表达载体,构建pGPU6/GFP/Neo-SiDaxx干扰载体,转染至HeLa细胞,利用荧光显微镜观察转染效率以及通过RT-PCR、Western Blot检测siRNA对HeLa细胞中hDaxx表达的影响。[结果]在转染了pGPU6/GFP/Neo-Si Daxx载体的HeLa细胞中,其hDaxx mRNA和蛋白的表达水平与空载体对照组比较明显降低。[结论]成功构建了hDaxx的干扰载体pGPU6/GFP/Neo-Si Daxx,该干扰载体能抑制HeLa细胞中hDaxx mRNA基...

[ Objective] To construct the interference vectors for human Death domain associated protein, and provide the experimental foundation about the function of hDaxx on the development of cervical cancer. [ Methods ] Using the hDaxx genome as template, the interference primers are designed, and the interference fragments for hDaxx RNA are amplified, and connected with pGPU6/GFP/Neo eukaryotic expression vectors for constructing the pGPU6/GFP/Neo - SiDaxx interference vectors. The vectors are digested by endonucleases, and therefore identified for sequencing. The interference vectors are transfecte...