期刊论文

中文

生物技术

1004-311X

2018

28

1

13-17

10.16519/j.cnki.1004-311x.2018.01.0003

国家自然科学基金项目（“MRP1/ABCC1基因3＇-UTR单核苷酸多态性介导miRNA对原发性肝癌多药耐药性的影响”,No.81372579） 湖南省教育厅科学研究项目（“MiR-4295靶向lncRNA HOTAIR调控Bim介导胃癌耐药机制的研究”,No.17C1402） 南华大学“大学生研究性学习和创新性实验计划”项目（“MiR-4295靶向PTEN介导胃癌耐药机制的研究”,No.2017XJYZ040）

本校为第一机构

[目的]构建FBXO47基因3＇-UTR双荧光素酶报告载体,并验证miR-33b-5p与FBXO47的靶向关系。[方法]采用生物信息学软件预测miR-33b-5p与FBXO47结合位点;利用PCR扩增FBXO47基因3＇-UTR序列,将其克隆到GV272载体中,构建FBXO47野生型及突变型双荧光素酶报告质粒;将miR-33b-5p或阴性对照分别与野生型GV272-FBXO47-wt 3＇-UTR或突变型GV272-FBXO47-mut 3＇-UTR双荧光素酶报告质粒共转染至293T细胞中,双荧光素酶报告系统检测各组荧光素酶活性。[结果]酶切及测序结果表明,野生型GV272-FBXO47-wt 3＇-UTR及突变型GV272-FBXO47-mut 3＇-UTR双荧光素酶报告载体构建成功;荧光素酶活性结果表明,相较于对照组,mi...

[Objective]To construct FBXO47 3＇-UTR dual luciferase reporter vector,and verify the targeted relationship between miR-33 b-5 p and FBXO47. [Methods] Bioinformatics software was used to predict the binding sites between miR-33 b-5 p and FBXO47. PCR was used to amplify FBXO47 gene 3＇-UTR sequence,then cloned it into GV272 vector to construct FBXO47 wild type and mutant dual luciferase report plasmid. Cotransfection of miR-33 b-5 p or negative control with wild type GV272-FBXO47-wt 3＇-UTR or mutant GV272-FBXO47-mut 3＇-UTR dual luciferase repo...