本发明涉及干细胞技术领域,尤其涉及胃癌干细胞冻存液及冻存方法。本发明提供了一种由冷冻保护剂和DMEM/F12培养基组成的胃癌干细胞冻存液及胃癌干细胞的冻存方法,本发明提供规定培养液成分简单,不含有血清,且能够实现对胃癌干细胞的稳定保存。本发明提供的方法简单易行,无需复杂仪器。实验表明,复苏后的GCSCs成团生长,大小、形态及数量与新分选的GCSCs比较无明显差别,CD44的表达也一样,说明成功获得用于冻存CD44(+)胃癌干细胞的有效冻存液。与新分选的GCSCs相比,冻存1个月、3个月及6个月后复苏的细胞中β#actin表达量差异不明显。表明复苏的GCSCs状态好,可用于后续实验。