目的：研究弓形虫棒状体蛋白ROP18是否与弓形虫抑制宿主细胞的凋亡有关。 方法:利用软件设计扩增ROP18基因的引物，在ROP18基因上游引入Flag标签序列，为方便下游克隆，在上游及下游引物的5’端分别引入BamHⅠ及HindⅢ酶切位点。酚-氯仿法提取弓形虫RH株基因组DNA，以其为模板PCR扩增ROP18基因。利用试剂盒纯化PCR产物，利用BamHⅠ和HindⅢ双酶切克隆到pcDNA3.1(+)真核表达载体的相同位点，构建pcDNA3.1(+)-Flag-ROP18真核表达载体,DNA序列分析鉴定正确后,大量提取质粒,利用试剂盒去除内毒素，脂质体法转染RAW264.7细胞表达。分离蛋白，SDS-PAGE及利用Flag标签抗体进行Western blotting检测R...
