目的:构建含梅毒螺旋体(Treponema pallidum, TP)外膜蛋白TP 0993的重组表达载体,在大肠杆菌中进行诱导表达,纯化表达产物并进行免疫原性和抗原性分析,为探索TP 0993重组蛋白在梅毒血清学诊断中的应用价值和其生物学功能提供实验依据。方法:通过Genbank获取选TP 0993基因序列,以TP Nichols株基因组DNA为模板,PCR扩增目的片段,将其亚克隆至原核表达载体pET28a(+)中构建重组质粒pET28a(+)/TP 0993,pET28a(+)/TP 0993经PCR、双酶切、测序鉴定后将其转化至表达宿主菌E.coli Rosseta中,IPTG诱导表达。采用SDS-PAGE和Western-blot分析和鉴定表达产物;Ni-NTA亲和层析柱纯化重组蛋白,BCA法测定蛋白浓度。...
