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2018-04-28

CN201810404756.0

2018-09-28

CN108587961A

421001 湖南省衡阳市蒸湘区常胜西路28号

罗满

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本校为第一完成单位

1.一种制备大肠埃希菌菌影并装载DNA质粒的方法,其特征在于,包括以下步骤：a、大肠埃希菌悬液中加入CaCO3,SDS,NaOH,28#40℃孵育,离心,收集沉淀,洗涤后收集沉淀；b、向步骤a洗涤后收集的沉淀中加入H2O2及缓冲液,28#40℃孵育,离心,收集沉淀,洗涤,收集沉淀；c、向步骤b收集的沉淀中加入乙醇,静置反应,离心,收集沉淀,洗涤,加入缓冲液制得菌影重悬液；d、将菌影重悬液、质粒、CaCl2混合,1#10℃孵育,然后30#50℃热激活处理后,冰浴反应,离心,收集沉淀,即得装载有质粒的菌影。

本申请公开了一种制备大肠埃希菌菌影并装载DNA质粒的方法,包括以下步骤：a、大肠埃希菌悬液中加入CaCO3,SDS,NaOH,28#40℃孵育,离心,收集沉淀,洗涤后收集沉淀；b、向步骤a洗涤后收集的沉淀中加入H2O2及缓冲液,28#40℃孵育,离心,收集沉淀,洗涤,收集沉淀；c、向步骤b收集的沉淀中加入乙醇,静置反应,离心,收集沉淀,洗涤,加入缓冲液制得菌影重悬液；d、将菌影重悬液、质粒、CaCl2混合,1#10℃孵育,然后30#50℃热激活处理后,冰浴反应,离心,收集沉淀,即得装载有质粒的菌影。本发明提供的使用化学渗透压法制备菌影,结合氯化钙法装载DNA质粒的方法,具有成本低、操作简单、裂解和装载效率高,批次间稳定,可...