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梅毒螺旋体Tp0463蛋白的表达及其在临床血清学诊断中应用的初步评价

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成果类型:
学位论文
作者:
刘小军
作者机构:
[刘小军] 南华大学
导师:
吴移谋;曾铁兵
语种:
中文
关键词:
梅毒螺旋体;重组抗原;酶联免疫吸附试验;血清学诊断
关键词(英文):
Tp0463
学位年度:
2011
学位授予单位:
南华大学
学科专业:
病原生物学
授予学位:
硕士
机构署名:
本校为第一完成单位
摘要:
目的:通过基因工程技术,表达梅毒螺旋体(Treponema pallidum, Tp)重组蛋白Tp0463,探讨其在梅毒临床血清学诊断中的价值,为发现Tp新的候选诊断抗原提供实验依据。方法:从Genbank获取Tp0463蛋白的基因序列,以Tp Nichols标准株的全基因组DNA为模板,PCR扩增该基因编码第8-110号氨基酸的基因片段;将目的基因克隆入T-A克隆载体pMD18-T中,再亚克隆入原核表达载体pET28a(+)中,构建重组质粒pET28a(+)/Tp0463,经PCR、双酶切与测序鉴定后转化至表达宿主菌E.coli BL21(DE3)中,IPTG诱导表达蛋白,SDS-PAGE分析目的产物的表达形式,用Ni-NTA亲和层析法纯化目的重组蛋白,SDS-PAGE分析纯化蛋白的...

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