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沙眼衣原体60 kDa外膜蛋白基因的克隆与表达

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成果类型:
期刊论文
作者:
陈超群;吴移谋;李忠玉;朱翠明;余敏君
作者机构:
南华大学医学院微生物学教研室,中国湖南,衡阳,421001
语种:
中文
关键词:
沙眼衣原体;omp2基因;基因克隆;表达
关键词(英文):
Omp2 gene;Gene clone;Expression
期刊:
实用预防医学
ISSN:
1006-3110
年:
2004
卷:
11
期:
1
页码:
7-10
基金类别:
湖南省卫生厅资助项目 (B2 0 0 3 - 0 78); 湖南省科技厅资助项目 (0 1SSY2 0 0 8- 6);
机构署名:
本校为第一机构
院系归属:
医学院
摘要:
目的克隆和表达沙眼衣原体60 kDa外膜蛋白(Omp2)基因. 方法 D型沙眼衣原体感染McCoy细胞后,抽提基因组DNA,经PCR扩增出omp2基因片段,与pUCm-T克隆载体连接,酶切纯化后克隆到原核表达载体pQE30,构建重组表达载体pQE30/omp2,PCR、酶切及测序鉴定.IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测有无蛋白的表达. 结果 (1)获得长约1 650 bp的PCR产物, 酶切结果显示所构建的重组质粒已成功地克隆了omp2 基因,序列分析结果与已知omp2序列相同;(2)SDS-PAGE检测表达产物,在相对分子量60 kDa处有表达条带;(3)诱导表达之菌体超声破碎后,目的蛋白主要以包涵体形式存在. 结论获得了Ct omp2基因片段,并在E.coli M15中成功表达.
摘要(英文):
Objective To clone and express the 60kDa outer membrane protein gene (omp2) from Chlamydia trachomatis(Ct). Methods Ct serovar D was cultured through infected the McCoy monolayer cell and then the Ct template DNA was extracted from the cultured cells. PCR was used to amplify the omp2 gene fragment from Ct chromosomal DNA. The PCR products were directly ligated into pUCm-T vector. After being digested with BamHⅠ+ HindⅢ and purified, the omp2 gene fragment was inserted into the compatible site of prokaryotic expression vector pQE30, then the co...

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